Determinação do perfil de ácidos graxos em Brachiaria spp. por eletroforese capilar

As forrageiras são os principais componentes da dieta de ruminantes, sendo fonte de energia e nutrientes para produção de leite e carne. Dentreos ácidos graxos encontradosnas forrageiras, dois (ácido linoleico - C18:2 n-6 e ácido α-linolênico - C18:3 n3) têm recebido atenção especial por serem precu...

Nível de Acesso:openAccess
Publication Date:2011
Main Author: Castro, Renata de Jesus Coelho lattes
Orientador/a: Oliveira, Marcone Augusto Leal de lattes
Co-advisor: Souza Sobrinho, Fausto de lattes
Banca: Jager, Alessandra Vincenzi lattes, Silva, Júlio César lattes
Format: Dissertação
Language:por
Published: Universidade Federal de Juiz de Fora (UFJF)
Programa: Programa de Pós-graduação em Química
Department: ICE – Instituto de Ciências Exatas
Assuntos em Português:
Áreas de Conhecimento:
Online Access:https://repositorio.ufjf.br/jspui/handle/ufjf/4330
Resumo Português:As forrageiras são os principais componentes da dieta de ruminantes, sendo fonte de energia e nutrientes para produção de leite e carne. Dentreos ácidos graxos encontradosnas forrageiras, dois (ácido linoleico - C18:2 n-6 e ácido α-linolênico - C18:3 n3) têm recebido atenção especial por serem precursores para a síntese do ácido linoléico conjugado (do inglês, CLA - Conjugated Linoleic Acid), uma classe compostos que reforçam a saúde encontrados predominantemente em produtos lácteos. O objetivo deste trabalho foi desenvolver um método alternativo para quantificação de C18:2 e C18:3 em forrageiras por meio da técnica de eletroforese capilar (EC), utilizando a espécie Braquiária ruzizienses como referência. Foi utilizado EC de zona com detecção indireta no UV em 224 nm, capilar com revestimento externo de teflon, e tempo de análise em torno de 10 minutos. Realizou-se um planejamento composto central rotacional (DCCR) com triplicata no ponto central para a otimização da composição do eletrólito de corrida, visando à separação do par crítico C16:0/C18:2. O eletrólito constituído de 15,0 mmol L-1 de NaH2PO4 / Na2HPO4 (pH 6,8); 8,0 de mmol L-1 Brij 35, 4,0 mmol L-1 de SDBS, 2,0% v/v de n-octanol e 43,5% v/v de acetonitrila foi otimizado. Além disso,três métodos de extraçãode lipídiosforam testados: 1- Hara e Radin; 2- Micro Folch e 3- Bligh e Dyer, os melhoresresultados foram obtidosusando o métododeHara eRadin. Após a otimização do sistema de eletrólito e escolhendo o método de extração de lipídios, duas curvas de calibração foram construídas em diferentes níveis de concentração para os ácidos graxos de interesse, utilizando C13:0 como padrão interno. Após a verificação de que não houve ocorrência de falta de ajuste nos modelos, o fator de resposta (Rf) foi calculado e aplicado para quantificação dos ácidos graxos de interesse na amostra de braquiária ruziziensis. O método otimizado por CZE foi então comparado com a cromatografia gasosa (o método AOCSoficial paraanálise de ácidosgraxo)satravés do teste t pareado.Não houve diferençaentre os métodosdentro de umintervalo de confiança de95%( p= 0,12 ).Os resultados indicam que o método otimizado por eletroforese capilar pode ser usado para determinação dos ácidos graxos mais abundantes em amostras de forragem. Este método alternativo tem vantagens sobre o método GC tradicional: menor tempo de análise, ausência de passos de derivatização no preparo da amostra, uso de colunas não-específicas e um custo analítico mais baixo.
Forages are the major components of ruminant diets, being a source of energy and nutrientsfor milk and meat production. Among the fatty acids found in forages, two (C18:2 n-6 and C18:3 n-3) have received particular attentiondue to theirroles as precursors for the synthesis of conjugated linoleic acid (CLA), a class of health enhancing compounds predominantly found in dairy products. The objective of this study was to develop an alternative method for quantification of C18:2 and C18:3 in forages through the capillary electrophoresis (CE) technique, using Brachiaria ruziziensesas the reference forage. The analytical procedure involved CE with indirect detection zone in the UV at 224 nm, capillary external coating of Teflon and analysis time around 10 minutes. Arotational central composite design (star design) with triplicate at the central point was used to optimize the composition of the electrolyte systemin order to separate the C16:0/C18:2 pair. The following electrolyte composition was obtained: 15.0 mmol L-1 NaH2PO4/Na2HPO4 buffer (pH~6,8), 8.0 mmol L-1 Brij 35, 4.0 mmol L-1 SDBS, 1.5% v/v n-octanol and 43,5% v/v ACN.Additionally, three methods of lipid extraction were tested: 1. Hara & Radin, 2. Micro Folch and 3. Bligh &Dyer; the best results were achieved by using the method of Hara and Radin.After optimizing the electrolyte systemand choosing thelipid extraction method, two calibration curves were made usingdifferentconcentrations of selected fatty acids and C13:0 as the internal standard. After checking for no occurrence of lack of fit of the models, a response factor (RF) was calculated and applied in the quantification ofselected fatty acids in the forage sample. The optimized CZE method was then compared to gas chromatography (the AOCS official method for fatty acid analysis) through the paired t-test. There was no difference between methods withina 95% confidence interval ( p= 0,12 ).Our results indicate that the optimized CE method proposed herein can be used to quantify the most abundant fatty acids in forage samples. Thisalternative methodhassomeadvantages over the traditional GC method: less timeconsuming, no derivatizationstepor specific separation columns required, and lower analytical cost.