Determinação de ácidos graxos em amostras alimentícias e biológicas utilizando eletroforese capilar de zona

Um método alternativo para a análise simultânea dos ácidos graxos (AG) majoritários cis-trans: esteárico (C18:0), elaídico (C18:1t), oleico (C18:1c), palmítico (C16:0), linoleico (C18:2cc ) e linolênico (C18:3ccc ), foi proposto utilizando a técnica de eletroforese capilar de zona (CZE) com detecção...

Nível de Acesso:openAccess
Publication Date:2014
Main Author: Barra, Patrícia Mendonça de Castro lattes
Orientador/a: Oliveira, Marcone Augusto Leal de lattes
Co-advisor: Sabarense, Céphora Maria lattes
Banca: Sousa, Rafael Arromba de lattes, Micke, Gustavo Amadeu lattes, Borges, Keyller Bastos lattes, Silva, José Alberto Fracassi da lattes
Format: Tese
Language:por
Published: Universidade Federal de Juiz de Fora (UFJF)
Programa: Programa de Pós-graduação em Química
Department: ICE – Instituto de Ciências Exatas
Assuntos em Portugês:
Áreas de Conhecimento:
Online Access:https://repositorio.ufjf.br/jspui/handle/ufjf/4319
Resumo Português:Um método alternativo para a análise simultânea dos ácidos graxos (AG) majoritários cis-trans: esteárico (C18:0), elaídico (C18:1t), oleico (C18:1c), palmítico (C16:0), linoleico (C18:2cc ) e linolênico (C18:3ccc ), foi proposto utilizando a técnica de eletroforese capilar de zona (CZE) com detecção indireta. A metodologia foi otimizada através do planejamento composto central rotacional 23 (23-CCD) e após estudos, juntamente com a Análise de Componentes Principais (PCA), chegou-se a um eletrólito com condições ótimas, composto por: 15,0 mmol L-1 de tampão NaH2PO4/Na2HPO4 com pH ≈ 6,86, 4,0 mmol L-1 de SDBS, 8,3 mmol L-1 de Brij 35, 45% v/v de acetonitrila e 2,1 % de 1-octanol. A quantificação dos AG em amostras reais foi realizada através do cálculo de fator de resposta (FR) com a posterior verificação da linearidade dos modelos matemáticos propostos. O método de CZE foi aplicado com sucesso e nenhuma diferença significativa foi encontrada dentro de intervalo de confiança de 95% quando comparado com a metodologia oficial por cromatografia à gás (GC) para as amostras alimentícias do tipo: azeite de oliva, óleo de soja, gordura vegetal hidrogenada, manteiga, margarina, requeijão e biscoito recheado. Além da utilização da metodologia para análise de amostras alimentícias, foi também aplicada na determinação AG no fígado de ratos Wistar de três grupos, que consumiram dietas, cuja fração lipídica era composta por óleo de soja utilizado por diferentes períodos de tempo em processos de fritura por imersão. Após 45 dias consumindo essas dietas, os ratos foram submetidos à eutanásia e o teor de AG no fígado foi monitorado por CZE. Os resultados obtidos foram comparados com o método oficial por cromatografia à gás e não foram observadas diferenças significativas no intervalo de confiança de 95% e/ou 99%. Os resultados dos eletroferogramas do fígado dos ratos foram avaliados por PCA, sendo possível obter um reconhecimento de padrão e discriminar o grupo final dos grupos intermediários e controle e, indicando que o tempo de exposição total de óleo submetido a processos de fritura pode ser considerado relevante para a avaliação da qualidade do óleo. Tendo observada diferença no teor de AG no fígado dos grupos de animais, buscou-se verificar possíveis biomarcadores para o metabolismo celular e, considerando que alguns elementos atuam como cofatores para a atividade enzimática, determinados minerais foram avaliados em amostras de fígado e fêmur dos ratos Wistar envolvidos no estudo supracitado, utilizando a técnica de espectroscopia de emissão atômica com plasma indutivamente acoplado (ICP OES). Sabe-se que todos os animais envolvidos neste estudo receberam a mesma quantidade de selênio e de mesma origem (Mix mineral). Entretanto, os animais pertencentes ao grupo final apresentaram uma diminuição considerável no teor de selênio quando comparados aos grupos controle e intermediário. Logo, pode-se dizer que a interação do selênio com outros componentes da dieta (AG) foi alterada, uma vez que os animais deste trabalho foram afetados distintamente pela dieta, apresentando uma grande dispersão nos valores de selênio no grupo final. A diminuição no teor de selênio do grupo final pode estar relacionada com a diminuição da função antioxidante, já que os processos de oxidação geram também compostos altamente reativos, que em excesso aumentam o estresse oxidativo de estruturas celulares.
An alternative method for the simultaneous analysis majority of cis/trans fatty acids (FA): stearic (C18:0), elaidic (C18:1 9t), oleic (C18:1 9c), palmitic (C16:0), linoleic (C18: 2 9c 12c) and linolenic (C18: 3 9c 12c 15c ) by Capillary Zone Electrophoresis (CZE) with indirect detection was proposed. The methodology was optimized through central composite rotational design 23 (CCD - 23) and after studies, along with the Principal Component Analysis (PCA) , the electrolyte with optimum conditions, consisted of 15.0 mmol L- 1 NaH2PO4/Na2HPO4 buffer at pH ≈ 6.86, 4.0 mmol L -1 SDBS , 8.3 mmol L -1 Brij 35, 45 % v/v acetonitrile and 2.1 % 1-octanol . The FA quantification in real samples was performed by calculating the response factor (Rf) with the subsequent linearity of the proposed mathematical models verification. The CZE method was successfully applied and no significant difference was found within the range of 95 % when compared with the official method by gas chromatography (GC) for food samples such as: olive oil, soybean oil, hydrogenated vegetable fat, butter, margarine, spreadable cheese and filled cookie. In addition to the use of the methodology for analysis of food samples was also applied to FA determination in the Wistar liver rat three groups and fed diets whose lipid fraction was composed of soybean oil used for different stages of time for deep frying processes. After 45 days consuming these diets, the rats were euthanized and the content of FA in liver was monitored by CZE. The results were compared with the official method by GC and no significant differences were observed in the range of 95 % and/or 99 % of confidence interval. The results of the rat liver electropherograms were evaluated by PCA, it was possible to obtain a recognition pattern and to discriminate the final group of the intermediate and control groups, indicating that total exposure time subjected to oil deep frying processes may be relevant for evaluating the quality of the oil. After detecting differences in the content of FA in the liver of animal groups, we required to verify potential biomarkers for cellular metabolism and, whereas some elements act as cofactors for enzyme activity, certain minerals were evaluated in samples of Wistar liver and femur rat involved in the study mentioned above, using the technique of Inductively Coupled Plasma Optic Emission Spectroscopy (ICP OES). It is known that all animals involved in this study received the same amount of selenium from the same origin (Mineral Mix). However, the animals belonging to the late group showed a significant decrease in selenium content in comparison with to the control and intermediate groups. Therefore, it is possible observe that the selenium interaction with other dietary components (FA) has been changed, since the animals in this study were distinctly affected by diet, with a broad dispersion in the values of selenium in the final group . The decrease in final group selenium content may be related to the decrease of antioxidant function , since oxidation processes also generate highly reactive compounds which excessive increase the oxidative stress of cell structures .