Vacina de DNA contendo o gene NS1 de dengue 2: resposta imune celular em camundongos

• Ano de defesa: 2020
• Autor(a) principal: Assis, Maysa Leandro de
• Orientador(a): Alves, Ada Maria de Barcelos, Costa, Simone Morais da
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Link de acesso: https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/43234
• topic: Dengue; Vacinas de DNA; Proteínas não Estruturais Virais; Dengue; Vacinas de DNA; Proteínas não Estruturais Virais

A febre da dengue é uma arbovirose pantropical que representa uma grande ameaça à saúde pública. A importância da resposta imune celular contra essa doença vem sendo cada vez mais ressaltada no desenvolvimento de vacinas, principalmente no que diz respeito à geração de respostas protetoras contra as proteínas não-estruturais do vírus. Nosso grupo vem há tempos desenvolvendo vacinas de DNA contra dengue com testes em modelos murinos. Uma destas vacinas é o plasmídeo pcTPANS1, baseada na proteína não-estrutural 1 (NS1) de dengue 2, que foi capaz de induzir altos níveis de proteção e títulos elevados de anticorpos. O presente trabalho teve como objetivo a identificação de peptídeos imunodominantes contidos na proteína NS1 reconhecidos por linfócitos T em camundongos BALB/c imunizados com a vacina pcTPANS1, bem como a investigação do papel desempenhado por essas células ativadas. Observamos que a vacina foi capaz de induzir respostas de células T com produção de IFN-\03B3 frente a uma biblioteca de peptídeos de NS1, através de ensaios de ELISPOT e de marcação intracelular de citocinas (ICS). Identificamos três peptídeos imunogênicos capazes de estimular a produção de IFN-\03B3 em camundongos vacinados com pcTPANS1 (N17, N46 e N67) e outros quatro peptídeos após desafio com DENV2 (N12, N14, N35 e N41), sendo o peptídeo N67 o mais imunodominante dentre estes. Além disso, avaliamos a produção de TNF-\03B1 e não observamos um aumento nas porcentagens de células produtoras desta citocina estimuladas com a maioria dos peptídeos da nossa biblioteca, com exceção dos peptídeos N67 e N17, este último somente após desafio com DENV2. Também procuramos identificar respostas de células T citotóxicas após estímulo com os peptídeos de maior significância estatística segundo nossos resultados (N14, N17, N35 e N67), através de ensaios de citotoxicidade in vivo Entretanto, não observamos diferenças nos percentuais de lise das células alvos pulsadas com estes peptídeos entre o grupo vacinado e não-vacinado. Selecionamos o peptídeo mais imunogênico (N67) para um ensaio comparativo com um peptídeo de 9 aminoácidos previamente descrito na literatura, AGPWHLGKL, cuja sequência está contida dentro do peptídeo N67. Observamos um percentual de lise de quase 100% nos camundongos vacinados que receberam os esplenócitos pulsados com este peptídeo, mas uma lise celular de apenas 32% quando pulsados com o peptídeo N67. Quando avaliamos a citotoxicidade por meio da marcação da molécula CD107a, não observamos diferenças significativas na quantidade de células expondo esse marcador após estímulo com tais peptídeos, apesar de ter sido notável um decréscimo na média de intensidade de fluorescência nas células advindas de animais imunizados. Por último, avaliamos a imunogenicidade dos nossos peptídeos em camundongos C57BL/6, de forma a considerar as diferenças oriundas da expressão de um haplótipo de MHC diferente ao do nosso modelo de estudo, e identificamos alguns peptídeos proeminentes na resposta de IFN-\03B3 em ambas as linhagens de camundongos. Para concluir, neste trabalho identificamos peptídeos importantes envolvidos na resposta celular direcionada contra a proteína NS1 de DENV2, ressaltando o papel desse braço da resposta imune na proteção contra dengue conferida pela vacina pcTPANS1.