Condições de conservação e armazenamento a longo prazo de amostras biológicas humanas para aplicação em biobancos com fins de pesquisa: uma revisão sistemática - Ferroco, Clara Lucy de Vasconcellos (2021)
Introdução: Amostras biológicas humanas são recursos valiosos, especialmente para a pesquisa translacional, na qual desempenham um papel importante tanto na compreensão da patogênese das doenças quanto no desenvolvimento de novos recursos diagnósticos e terapêuticos. Entretanto, os resultados das análises realizadas a partir desses recursos podem ser influenciados por variáveis pré analíticas, ou seja, condições nas quais as amostras foram expostas durante a coleta, processamento e armazenamento. Justificativa: Conhecer as possibilidades de cenários que envolvem a conservação das amostras e seus respectivos biomarcadores, pode auxiliar na decisão de se incorporar amostras oriundas de biorrepositórios nos acervos dos biobancos, visto que estes devem assegurar a cessão de materiais biológicos de qualidade à comunidade científica. Objetivos: Sintetizar a literatura publicada em bases de dados indexadas, por meio de uma revisão sistemática, apresentando as condições de conservação e armazenamento a longo prazo de amostras biológicas, a fim de que sejam aplicadas em biobancos. Metodologia: Em consulta realizada ao Sistema Plataforma Brasil, foram identificados os dois principais materiais biológicos armazenados nos biobancos credenciados no território nacional (tecidos, sangue e derivados). Foi realizada uma busca eletrônica na literatura publicada até novembro de 2019 nas bases de dados Web of Science, Pubmed, Embase, LILACS e IBECS (BVS). Dois revisores independentes selecionaram e extraíram os dados sobre parâmetros pré-analíticos que podem influenciar na qualidade de amostras de tecido, sangue e derivados. Resultados: A síntese qualitativa incluiu 34 artigos, sendo 17 referentes a amostras de tecido e 17 a amostras de sangue e derivados, publicados entre 2002 e 2019. Para amostras de tecido, o uso da técnica de congelamento instantâneo (snap-frozen) e/ou uso de estabilizantes somados ao armazenamento em temperaturas ultrabaixas (-80 °C ou menos) por até 27 anos demonstraram ser medidas eficazes para manutenção da viabilidade da maioria dos ácidos nucleicos. Tempo de isquemia de até 70 minutos e ciclos de congelamento e descongelamento não interferiram na qualidade dos materiais avaliados. Para amostras de sangue, diferentes métodos de conservação foram avaliados. Manchas de sangue secas em papel de filtro conservadas em temperatura ambiente por até 26 anos, são viáveis para avaliação de marcadores genéticos. Amostras de sangue total conservadas em seus tubos primários contendo EDTA, ACD ou PAXgene®, sob diferentes temperaturas (ambiente até -80 °C) por até 19 anos apresentaram pequenas alterações nos alvos de interesse, principalmente nas amostras mantidas em EDTA a temperatura ambiente para avaliação de Cd, Mn, Pb, Se e Hg no sangue. Para amostras de soro e plasma, foram observadas pequenas alterações na dosagem de metabólitos e proteínas, associadas ao armazenamento por 2 e 17 anos, respectivamente, a -80 °C. Amostras de Buffy Coat e PBMC foram mantidas a -80 °C e em nitrogênio líquido, respectivamente. Ácidos nucleicos se mantiveram viáveis, bem como as células avaliadas em PBMC. Conclusão: Os achados apresentados neste estudo fornecem maior compreensão a respeito da influência de variáveis pré-analíticas na integridade de biomarcadores, permitindo que curadores ponderem sobre a incorporação, em seus biobancos, de amostras que foram submetidas às condições avaliadas