Estudo comparativo das técnicas de hibridização in situ e reação em cadeia da polimerase-quantitativa (qPCR) para o diagnóstico da infecção cutânea por Leishmania infantum em cães - Silva, Ricardo Gonçalves (2018)
A leishmaniose visceral zoonótica é uma doença causada pelo protozoário Leishmania infantum e de grande importância em saúde pública no Brasil, que acomete humanos e mamíferos domésticos e silvestres. O diagnóstico da infecção por L. infantum em cães é feito por meio de técnicas laboratoriais, que devem ser acuradas, pois esses animais são a principal fonte de infecção para o vetor biológico no meio urbano. Amostras de pele fixadas em formalina tamponada a 10% e emblocadas em parafina (FFEP) são muito utilizadas na rotina para o diagnóstico da infecção por L. infantum em cães, por serem um bom alvo e prescindirem de condições ideais de refrigeração e transporte a campo. Muitas vezes essas são as únicas amostras disponíveis para o diagnóstico da espécie de Leishmania spp. Nesses casos, o diagnóstico a nível de espécie somente é possível pela utilização da técnica de hibridização in situ (ISH) e técnicas de PCR, como a PCR quantitativa (qPCR). Porém, a sensibilidade dessas técnicas em pele FFEP é pouco conhecida. Portanto, o objetivo desse estudo é determinar a sensibilidade das técnicas de ISH e qPCR em amostras de pele FFEP para o diagnóstico da infecção por L. infantum em cães usando amostras de pele positivas na cultura parasitológica (CP) como método padrão de referência. Amostras de pele FFEP de 48 cães, 27 com presença de sinais clínicos e 21 com ausência de sinais clínicos, com infecção cutânea para L. infantum confirmada na CP e eletroforese de enzimas multilocus, foram examinadas pelas técnicas de ISH e qPCR usando sondas específicas para L. infantum . Essas amostras foram coletadas por biopsia de pele íntegra da região escapular de cães de diferentes áreas endêmicas no Brasil, entre 2008 e 2015. A técnica de ISH foi examinada por dois observadores com diferentes experiências em microscopia óptica. As sensibilidades encontradas para as técnicas de qPCR e ISH foram respectivamente 77% e 58%. As sensibilidades da técnica de qPCR em cães com presença de sinais clínicos e ausência de sinais clínicos foram 70,4% e 85,7%, respectivamente. As sensibilidades da técnica de ISH em cães com presença de sinais clínicos e ausência de sinais clínicos foram 55,5% e 62%, respectivamente. A concordância interobservadores na técnica de ISH foi suave (Kappa=0,32). ISH apresentou sensibilidade diretamente associada à carga parasitária quantificada de L. infantum na pele. As técnicas de ISH e qPCR apresentaram sensibilidades satisfatórias no diagnóstico da infecção por L. infantum em amostras de pele de cães FFEP, inclusive em cães com ausência de sinais clínicos, sendo a qPCR a técnica mais sensível. Quando utilizadas em conjunto, essas duas técnicas aumentam a sensibilidade do diagnóstico de L. infantum na pele FFEP de cães e permitem a identificação de infecções ativas por esse parasito