Separação de células CHO utilizando hidrociclones

• Ano de defesa: 2007
• Autor(a) principal: Pinto, Rodrigo Coelho Ventura
• Orientador(a): Castilho, Leda dos Reis, Medronho, Ricardo de Andrade
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Link de acesso: https://arca.fiocruz.br/handle/icict/34173
• topic: Células CHO; Hidrociclones; Apoptose; CHO Cells; Hydrocyclones; Apoptosis; Células CHO; Apoptose

No presente trabalho, estudou-se o uso de hidrociclones na separação de células animais da linhagem CHO (Chinese hamster ovary). Empregaram-se diferentes técnicas para avaliar os efeitos do uso dos hidrociclones sobre a viabilidade de células CHO.K1 e CHO rhGM-CSF cultivadas a baixas concentrações de soro fetal bovino. Na primeira fase do trabalho, foi possível determinar modelos matemáticos para descrever o desempenho dos hidrociclones em função de três variáveis (queda pressão, diâmetro de overflow e underflow). Foram verificadas altas eficiências, geralmente acima de 97%. As configurações que apresentaram melhor desempenho foram testadas quanto à capacidade de se manter a viabilidade da cultura, tendo sido constatadas baixas quedas na viabilidade celular (cerca de 5%). Testes específicos para identificar células apoptóticas indicam que o hidrociclone não induziu apoptose nas culturas observadas. Na segunda parte do trabalho, os hidrociclones foram usados em biorreatores agitados em perfusão para promover a retenção celular. Apesar de não ter sido possível alcançar altas densidades celulares em biorreatores de pequena escala, foi possível constatar que as culturas apresentaram crescimento significativo, indicando que seria possível alcançar densidades celulares maiores. Durantes os experimentos foram mantidas altas viabilidades celulares e a produtividade da cultura, além de não ser constatada a indução de apoptose. Na fase final, o hidrociclone foi empregado em um biorreator de escala industrial. Assim como observado anteriormente, o equipamento promoveu altas eficiências de separação, sem influenciar o metabolismo e viabilidade da cultura.