Caracterização preliminar de proteínas relacionadas à criopreservação do sêmen caprino. - BARROSO, M. L. da S. (2018)
Resumo: As proteínas são moléculas formadas por cadeias de aminoácidos e desempenham importantes funções na reprodução e no processo de criopreservação do sêmen. O objetivo desse trabalho foi caracterizar o perfil proteico do plasma seminal de reprodutores caprinos da raça Saanen. Para tanto, seis reprodutores caprinos da raça Saanen foram usados para as coletas de sêmen através de vagina artificial. As análises de volume, concentração espermática, aspecto, motilidade e vigor foram avaliadas antes e depois da congelação. Para obtenção do plasma seminal, o sêmen fresco foi centrifugado a 10000x g durante 15 minutos à temperatura de 4º C, e posteriormente realizada a eletroforese bidimensional (2DE). Os géis foram escarneados e analisados usando-se o Software ImageMaster 2D Platinum 7.0. A congelação do sêmen foi realizada através da máquina TK3000 usando como solução diluidora o Tolera-D®. O sêmen foi submetido a duas avaliações pós-descongelação, sendo a primeira em uma semana e a segunda aos cinco meses. Para as análises espermáticas utilizou-se tanto a microscopia óptica como o sistema CASA, nas duas avalições, respectivamente. Para os parâmetros concentração e volume do sêmen fresco, aplicou-se o teste F, através da análise de variância. Nos dados das avaliações espermáticas do sêmen fresco e pós-descongelado, foram utilizadas análises de variância, seguido de teste Bonferroni. A motilidade do sêmen fresco oscilou de 80% a 90% e o vigor de 3,67 a 4,6. No sêmen pós-descongelado a motilidade variou de 49% a 62% e o vigor de 2,80 a 3,0, sendo que um animal apresentou baixa motilidade (13,33%) e vigor (1,0). Os principais spot’s específicos ligados à reprodução apresentaram peso molecular variando de 12 kDa a 66 kDa e pI de 4,37 a 9,57. Os resultados dos géis demonstraram que os ejaculados dos reprodutores se assemelharam entre si no perfil proteico bidimensional do plasma seminal, além de se observar nos animais a presença de spot’s específicos ligados à reprodução, em funções como: espermatogênese, maturação espermática, motilidade espermática, reação acrossômica, diferenciação de células germinativas espermatogênicas, entre outras. O perfil proteomico do plasma seminal encontrado evidenciaram as seguintes proteinas: ASZ1, RNS10, INHBA, OSTP, ALBU, PTGDS, SRY, STX1B, LEP, LSHB, DHSO, BRS3, PRND e CIB1. Provavelmente algumas dessas proteínas estão relacionadas com a qualidade do sêmen caprino criopreservado. As possiveis proteínas são prostaglandina-H2, albumina, leptina, SRY, STX1B e FSHB. Abstract: Proteins are molecules formed by chains of amino acids and play important roles in the reproduction and the process of cryopreservation of semen. The objective of this work was to characterize the protein profile of the seminal plasma of Saanen goat breeders. For this purpose, six goat breeders of the Saanen breed were used to collect semen through an artificial vagina. Analyzes of volume, sperm concentration, appearance, motility and vigor were evaluated before and after freezing. To obtain the seminal plasma, the fresh semen was centrifuged at 10000xg for 15 minutes at 4º C, and afterwards the two-dimensional electrophoresis (2DE) was performed. The gels were scanned and analyzed using the ImageMaster 2D Platinum 7.0 Software. Freezing of the semen was performed using the TK3000 machine using Tolera-D® as a dilution solution. The semen was submitted to two post-thaw evaluations, the first being in one week and the second to five months. For the spermatic analyzes, both the optical microscopy and the CASA system were used in the two evaluations, respectively. For the concentration and volume parameters of fresh semen, the F test was applied through analysis of variance. In the data of sperm evaluations of fresh and post-thawed semen, analyzes of variance were used, followed by Bonferroni test. The motility of fresh semen ranged from 80% to 90% and vigor from 3.67 to 4.6. In post-thawed semen the motility ranged from 49% to 62% and vigor from 2.80 to 3.0, and one animal had low motility (13.33%) and vigor (1.0). The main specific spots linked to reproduction had molecular weight ranging from 12 kDa to 66 kDa and pI from 4.37 to 9.57. The results of the gels demonstrated that the ejaculates of the reproducers resembled each other in the two-dimensional protein profile of the seminal plasma. In addition, the presence of specific spots associated with reproduction were observed in the animals, such as: spermatogenesis, sperm maturation, sperm motility, reaction spermatogenic germ cell differentiation, among others. The proteomic profile of the seminal plasma found evidenced the following proteins: ASZ1, RNS10, INHBA, OSTP, ALBU, PTGDS, SRY, STX1B, LEP, LSHB, DHSO, BRS3, PRND and CIB1. Probably some of these proteins are related to the quality of cryopreserved goat semen. Possible proteins are prostaglandin-H2, albumin, leptin, SRY, STX1B and FSHB