Efeito da microgravidade simulada em fibroblastos de pele humana - Bellicanta, Patrícia Lazzarotto (2016)
Introdução: As características da plasticidade inerentes das células de fibroblastos humanos os tornam uma ferramenta importante para avaliar os efeitos da microgravidade em um nível celular. Este estudo analisou o comportamento dos fibroblastos fragmento de pele humanas em um ambiente de microgravidade simulada. Métodos: células de fibroblasto humanos em 8a e 17a passagem, cultivadas em condições normais em incubadora a 37° C com 5% de CO2, foram submetidos à microgravidade simulada em um clinostato-3D por um período de 24h e 40h. Após a exposição, as células de cada passagem foram analisadas e comparadas com o grupo de controle (1G) ensaios de proliferação celular (population doubling), ensaios de passagem e análise microscópica, bem como a análise de PCR para a detecção de variações na expressão de genes relacionados com o ciclo celular (p21, p16). Resultado: Antes da exposição microgravidade, células pertencentes à passagem 17ª apresentaram características de células num estado apoptótico. Depois de 24h e 40h de microgravidade, as células de ambos os grupos se mostraram mais confluentes e alongadas. A análise de PCR demonstrou que a expressão de p21 foi diminuída enquanto p16 aumentou. Além disso, a análise PCR mostrou a diferença na expressão de genes p21 e p16 entre as amostras 24h e 40h. Discussão: A presente pesquisa mostrou que as células de 17ª passagem tornaram- se mais confluentes e alongadas após a exposição microgravidade, uma característica das células com menor número de passagens, sugerindo alterações no seu citoesqueleto . Este resultado foi confirmado por análise de PCR, onde foi demonstrado uma diminuição na expressão de p21. Esse resultado confirma descobertas anteriores de que entre 588 genes testados, o gene p21 apresentou uma expressão negativa. Por outro lado, o gene p16 mostrou uma expressão positiva. Uma vez que ambos os genes P21 e P16 estão relacionadas com o ciclo celular, estes resultados sugerem a hipótese de alterações importantes tenham ocorrido no citoesqueleto celular e, consequentemente, uma provável alteração na produção de proteínas reguladoras do ciclo celular (ciclinas). Além disso, a análise de RT-PCR demonstrou uma diferença na expressão do gene p21 e p16 entre as amostras 24h e 40h, indicando a necessidade de uma comparação mais detalhada entre os tempos de exposição. Foram também percebidas alterações no nível de plasticidade dos fibroblastos de 17ª passagem e 8ª passagem, devido a expressão de marcadores de pluripotência Oct4, Nanog.