Preservacao de Foliculos Pre-Antrais Bovinos - Celestino, Juliana Jales de Holanda (2006)
A manutencao da viabilidade folicular durante o transporte de ovarios e de fundamental importancia para o sucesso de tecnicas como a criopreservacao e cultivo in vitro. Entretanto, geralmente a coleta dos ovarios ocorre em locais distantes dos laboratorios especializados em biotecnicas reprodutivas. Neste sentido, este trabalho teve como objetivos: 1) investigar a eficiencia da solucao salina 0,9% (SS) e TCM 1999 na preservacao de foliculos ovarianos pre-antrais (FOPA) bovinos in situ em diferentes temperaturas e tempos de incubacao (Fase I); 2) avaliar a viabilidade e ultra-estrutura de FOPA bovinos criopreservados com ou sem previo armazenamento do tecido ovariano (Fase II). Na Fase I, ainda no abatedouro, o par ovariano de cada animal (n=5) foi dividido em 25 fragmentos. Um fragmento foi imediatamente fixado para analise histologica (controle). Os demais 24 fragmentos, foram aleatoriamente mantidos em SS ou TCM 199 a 4,20 ou 39 ºC, por 2, 4, 12 ou 24h. Na Fase II, de cada par ovariano (n=5), um fragmento foi tambem tomado aleatoriamente e imediatamente fixado para analise histologica (controle) e uma pequena parte desse fragmento para a analise ultra-estrutural. Em seguida, os ovarios foram transportados ao laboratorio, um em SS a 20 ºC e o outro a 4 ºC, os quais foram mantidos nas citadas temperaturas por 1 (Protocolo 1 - padrao) ou 24h (Protocolo 2), respectivamente. Em seguida, o par ovariano foi dividido em 38 fragmentos e submetidos ao teste de toxicidade (exposicao) ou congelacao na presenca de dimetilsulfoxido (DMSO), propanodiol (PROH), etilenoglicol (EG) ou glicerol (GLI). Em ambas as fases (I e II), o percentual de FODA normais e degenerados oriundos do controle e dos diferentes tratamentos foram comparados atraves do teste do Qui-quadrado (P<0,05). A conservacao a 4 ºC, em ambas as solucoes, manteve a percentagem de FOPA normais similar ao controle. Alem disso, em ambas as solucoes, independente do tempo de incubacao, a percentagem de foliculos normais apos conservacao a 39 ºC foi (P<0,05) inferior aquela obtida com 4 e 20 ºC. Com relacao a Fase II, o transporte dos ovarios a 20 ºC, bem como o resfriamento previo a 4 ºC/24h, nao reduziram (P>0,05) o percentual de FOPA viaveis quando comparado ao controle. Alem da histologia no controle, foi analisada a viabilidade folicular atraves do corante vital azul de Trypan, e os dados confirmados pela analise da ultra-estrutura folicular atraves da microscopia eletronica de transmissao. Resultados similares foram obtidos quando os fragmentos, respectivamente resfriados ou nao, foram expostos ao MEM, EG 1,5 M, bem como congelados na presenca de EG 1,5 M. O DMSO 1,5 M apresentou-se similar ao controle apenas apos exposicao e congelacao sem resfriamento previo a 4 ºC. Pode-se concluir que FOPA bovinos podem ser conservados eficientemente a 4 ºC por ate 24h em SS, e que o armazenamento do tecido ovariano nesta solucao, tempo e temperatura nao afeta o sucesso da congelacao de FOPA bovinos, desde que na presenca de EG 1,5 M.Palavras-chave: resfriamento, criopreservacao, viabilidade, ultra-estrutura, FOPA, bovinos.