Avaliação da atividade anti-Leishmania do extrato hidroalcoólico e frações de Tephrosia cinerea (L.) Pers - Bezerra, Jeamile Lima (2012)
O gênero Tephrosia (Fabaceae), com cerca de 300 espécies, é amplamente distribuído nas regiões tropicais e subtropicais, sendo trinta espécies nativas da América do Sul. Já foram descritas para o gênero atividades inseticida, pesticida, anti-helmíntica, anticancerígena, antiulcerogênica e anti-Leishmania. Tephrosia cinerea (L.) Pers, conhecida popularmente como anil bravo, é um arbusto utilizado empiricamente no tratamento de infecções, inflamações, úlceras, afecções nervosas e diarréias. O objetivo deste estudo foi avaliar o extrato hidroalcoólico de Tephrosia cinerea quanto à atividade leishmanicida, em ensaios in vivo e in vitro, analisando também a resposta inflamatória e a toxicidade aguda e crônica. Extrato de folhas (EHT), vagem, flores e raízes foram obtidos por maceração com etanol 70% e testados contra promastigotas de Leishmania amazonensis. Realizou-se fracionamento biomonitorado do EHT através de técnicas de partição líquido-líquido e cromatografia em coluna de sílica gel, resultando no isolamento de uma fração flavanoídica que exibiu atividade expressiva com CI50 de 0.54, 3.36 e 4.96 µg/mL para L. amazonensis, Leishmania chagasi e Leishmania braziliensis, respectivamente. Tratamento in vitro com EHT (40 e 80 µg/mL) e a fração flavonoídica (5 µg/mL) reduziu em 65, 74,5 e 69%, respectivamente, a infecção de macrófagos por L. amazonensis. Em virtude da atividade expressiva, o ensaio in vivo foi conduzido utilizando camundongos C57Bl/6 infectados no coxim plantar esquerdo com 5x105 de L.amazonensis e no 45º dia iniciamos o tratamento por via intralesional com a fração flavonoídica (10mg/kg/dia) ou antimoniato de meglumina (28mg/kg/dia) ou solução tamponada com fosfato (PBS, controle negativo). Os resultados do tratamento mostram atividade leishmanicida in vivo de T. cinerea. Verificamos a redução significativa no tamanho das patas do grupo tratado com fração flavonoídica em relação ao controle, indicando regressão da lesão leishmaniótica. Dosagem sérica das citocinas IFN-γ, IL-4 e IL-10 mostrou elevação significativa na concentração de IFN-γ apenas no grupo tratado com a fração flavonoídica. A técnica de imunohistoquímica foi empregada para determinar a carga parasitária do baço e lesão de pata, através da contagem direta das amastigotas nesses tecidos. O resultado obtido revelou menor parasitemia no baço e lesão de pata de animais tratados com a fração flavonoídica em relação ao controle negativo, sendo que, em relação ao antimoniato de meglumina, observamos menor carga parasitária somente no baço. O efeito antiinflamatório de EHT foi evidenciado em modelos clássicos de inflamação. Tratamento com EHT na dose de 100mg/Kg inibiu o edema de pata, sendo esta inibição mais expressiva na 3ª hora. No modelo de peritonite por corpo estranho, o tratamento reduziu significativamente a contagem de neutrófilos. O tratamento diário com 10, 100 e 250 mg/kg de EHT reduziu significativamente o granuloma induzido por corpo estranho. A contagem diferencial do granuloma revelou aumento de macrófagos e diminuição dos neutrófilos, sugerindo uma modulação dainflamação. Em relação à avaliação toxicológica, não se observou morte e nem tampouco alterações macroscópicas ou microscópicas nos órgãos vitais nos animais tratados com T. cinerea, sugerindo segurança no uso da espécie. Após a análise dos resultados obtidos, foi proposta formulação farmacêutica contendo extrato e/ou frações ativas das folhas de Tephrosia cinerea e uso no tratamento da lesão leishmaniótica, permitindo o depósito de patente junto ao Instituto Nacional de Propriedade Intelectual, sob nº 080, em 18 de outubro de 2011.  Palavras-chave: Tephrosia cinerea. Leishmania amazonensis. Atividade leishmanicida. Inflamação. Avaliação toxicológica.