Criopreservação de sementes de orquídeas brasileiras - Ferrari, Edilene Aparecida Preti (2024)
Resumo: A criopreservação é o método de conservação em que o material biológico é submetido à temperaturas extremamente baixas utilizando nitrogênio líquido (- 196ºC) ou em sua fase de vapor (-15ºC), possibilitando a conservação de germoplasmas de interesse ou em risco de extinção, em um espaço relativamente pequeno Para espécies de Orchidaceae, tem-se utilizado sementes, protocormos e suspensão de células Na criopreservação é necessário a utilização de soluções que preservem a integridade da membrana e evite a formação dos cristais de gelo no interior das células Essas soluções crioprotetoras são substâncias químicas que possuem ou não a habilidade de penetrar as membranas celulares O objetivo deste trabalho foi avaliar a influência da umidade e soluções crioprotetoras na criopreservação de sementes de orquídeas brasileiras do gênero Cattleya e MiltoniaNo primeiro experimento, as sementes foram imersas em soluções crioprotetoras e de vitrificação e após em nitrogênio líquido (NL) (-196 ºC), com os tratamentos: T1 - controle; T2 - glicerol 2M (2 min); T3 - sacarose ,4M (2 min); T4 - glicerol 2M (2 min) + sacarose ,4M (2 min); T5 - glicerol 2M (2 min) + PVS2 (1 min); T6 - glicerol 2M (2 min) + PVS2 +floroglucinol a 1% (1 min); T7 - sacarose ,4M (2 min) + PVS2 (1 min); T8 - sacarose ,4M (2 min) + PVS2 +floroglucinol a 1% (1 min); T9 - glicerol 2M (2 min) + sacarose ,4M (2 min) + PVS2 (1 min); T1 - glicerol 2M (2 min) + sacarose ,4M (2 min) + PVS2 + floroglucinola 1% (1 min) No segundo experimento, as sementes das orquídeasCattleyalabiataLindl eMiltoniaregnelliRchbf foram submetidas ao processo de secagem em estufa ou aumento da umidade em recipiente de vidro hermético até alcançarem os graus de umidade estabelecidos para compor os seis tratamentos (4, 6, 8, 1, 12 e 15 %) e criopreservadas a -196ºC durante 24 horas e, em seguida, descongeladas e analisadas Em ambos os experimentos foram avaliadas a porcentagem de sementes viáveis, porcentagem de protocormos provenientes de sementes criopreservadas que se mantiveram vivos após 15 dias do subcultivo, massa fresca e seca de plântulas e número de brotos Os dados foram submetidos à análise de variância (ANOVA) e as médias comparadas pelo teste de Tukey a 5% de signeficânciaEste estudo demonstrou que é possível criopreservar sementes de CattleyalabiataLindl e MiltoniaregnelliRchbf diretamente em nitrogênio líquido (-196°C) sem a necessidade de pré-tratamento com soluções crioproteotras sendo que o grau ideal de umidade para obtenção de maior percentual de sementes viáveis é de 4%