Detecção e caracterização molecular de norovírus genotipos GII-11 e GII-19 em suínos assintomáticos - Silva, Patrícia Fernandes Nunes da (2024)
Resumo: Os norovírus (NoV) são os maiores causadores de gastroenterites não-bacterianas em seres humanos no mundo todo, incluindo os casos associados com surtos de origem alimentar e veiculados pela água Os membros da família Caliciviridae são vírus pequenos, ãoenvelopados e apresentam genoma de RNA fita simples positiva e poliadenilada As noroviroses também têm sido encontradas em animais de produção como bovinos, suínos e ovinos A detecção do RNA viral em suínos adultos assintomáticos em países da Europa, América do Norte, Australásia e América Latina tem levantado interesse na saúde pública, como a transmissão zoonótica dos NoV suínos aos seres humanos Embora o papel do NoV suíno (PoNoV) ainda não esteja estabelecido nos países em desenvolvimento, estudos epidemiológicos têm demonstrado a ocorrência mundial dessa calicivirose nessa espécie animal Neste contexto, o objetivo deste estudo foi detectar NoV em amostras de fezes de animais assintomáticos em fase terminação (9-24 semanas de idade), em propriedades suinícolas (n=16) localizadas na cidade de Toledo, Estado do Paraná, Brasil As amostras fecais (n=112) foram coletadas uma única vez em forma de pool diretamente das baias nos meses de Dezembro (28) e Junho (29) e estocadas a 4oC para posterior investigação As reações de transcrição reversa seguida da reação em cadeia pela polimerase (RT-PCR) foram realizadas utilizando primers específicos desenhados para amplificar parcialmente a região Nterminal do gene que codifica a proteína do capsídeo do PoNoV Os produtos de PCR apresentando 181pb de tamanho esperado foram purificados e a quantificação do produto amplificado foi realizada por meio de kits comerciais O MegaBACETM foi utilizado para o sequenciamento, realizado com os primers forward e reverse A análise de qualidade das sequências foram obtidas utilizando os softwares Phred e CAP3 e a procura de similaridades foi realizada com sequências depositadas no GenBank (BLAST) O alinhamento múltiplo e a matriz de identidade foram obtidas através do programa BioEdit A árvore filogenética foi reconstruída a partir do algorítimo Neighbor-Joining, baseadas no modelo Poisson correction, com 1 replicações de bootstrap, utilizando-se o software MEGA 4 Oitenta e oito porcento (14/16) dos rebanhos investigados foram considerados positivos para a presença do NV Além disso, em 51,8% (58/112) das amostras fecais foi verificada a presença do vírus Setenta e dois porcento (5/7) das granjas brasileiras de terminação visitadas em 28 tinham a circulação do NoV e todas as propriedades visitadas em 29 (n=9) foram consideradas positivas para o PoNoV A análise filogenética de sete sequências permitiu agrupar seis estirpes brasileiras do PoNoV no genogrupo II genotipo 11 (GII-11) e uma estirpe no GII-19, juntamente com outros isolados de PoNoV já caracterizados Os resultados mostraram que o PoNoV está difundido nos rebanhos suínos incluídos neste estudo e uma alta frequência de infecção foi verificada em animais sem diarréia Considerando o interesse da saúde pública sobre a transmissão zoonótica do PoNoV, esses resultados, obtidos em uma importante região brasileira de produção de suínos, evidenciam a importância de se realizarem futuros estudos epidemiológicos e moleculares em estirpes de NoV de origem suína