Discriminação molecular de linhagens de Aspergillus niger sensu strico produtoras e não produtoras de ocratoxina A - Fier, Carla Beatriz (2024)
Resumo: A ocratoxina A (OTA), uma micotoxina com propriedades nefrotóxica e genotóxica, tem recebido destaque devido à freqüente contaminação de produtos destinados à alimentação A OTA é sintetizada por espécies pertencentes aos gêneros Penicillium e Aspergillus, entre elas, Aspergillus niger, uma das espécies fúngicas de maior importância econômica devido a sua utilização industrial na produção de enzimas e ácidos orgânicos A via de biossíntese da OTA ainda não foi completamente esclarecida para nenhuma espécie fúngica Entretanto, o modelo proposto sugere que a enzima policetídeo sintase (PKS) está envolvida na formação de um dos precursores dessa micotoxina Recentemente, o genoma de A niger CBS 51388 foi completamente seqüenciado e 34 open reading frames (ORF) para PKSs distintas foram descritas Com o objetivo de identificar entre essas ORFs, um gene que pudesse discriminar linhagens de A niger produtoras e não produtoras de OTA, investigamos no genoma dessa espécie, seqüências similares a genes que expressam enzimas PKS relacionadas com a biossíntese de OTA A partir do gene pks previamente caracterizado em A ochraceus, foi identificado no genoma de A niger, com cerca de 8% de identidade com o gene pks, a ORF An15g792 que codifica para uma suposta enzima PKS Um par de primers construído a partir do gene An15g792 foi utilizado para amplificá-lo em linhagens de A niger produtoras e não produtoras de OTA, através da técnica de PCR O amplicon foi verificado apenas em linhagens produtoras da toxina, indicando que esse gene não está presente em linhagens não produtoras de OTA A técnica de Southern blot, utilizando como sonda um fragmento de 556pb da seqüência An15g792, repetiu os resultados obtidos na PCR O sinal de hibridação da sonda foi observado apenas em isolados ocratoxigênicos e confirmou a ausência do gene em linhagens de A niger incapazes de sintetizar a micotoxina A análise comparativa in silico entre o genoma de duas linhagens de A niger (CBS 51388 e ATCC 115) revelou que a ORF An15g792 está ausente na linhagem ATCC 115, confirmando que este gene é específico para algumas linhagens Através da análise por RT-PCR em tempo real foi possível verificar uma correlação positiva entre os transcritos do gene An15g792 e a quantidade de OTA produzida por A niger