Identificação e aspectos biológicos do nematoide entomopatogênico Heterorhabditis amazonensis isolado UEL 08

• Ano de defesa: 2024
• Autor(a) principal: Guide, Bruna Aparecida
• Orientador(a): Neves, Pedro Manuel Oliveira Janeiro [Orientador]
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Palavras-chave em Português: Nematóides entomopatogênicos; Heterorhabditis; Classificação; Criopreservação; Insect nematodes; Cryopreservation; Insect nematodes - Pests - Biological control; Classification
• Link de acesso: https://repositorio.uel.br/handle/123456789/14745

Resumo: Em diversos países, nematoides entomopatogênicos (NEPs) são amplamente utilizados no controle de pragas Estes organismos vivem no solo sob a forma de juvenis infectantes (JIs), que carregam no seu intestino bactérias simbiontes, responsáveis pela morte do inseto hospedeiro No Brasil, estudos relacionados ao isolamento, caracterização e identificação destes entomopatógenos são recentes e escassos Assim, este trabalho teve como objetivos, a classificação taxonômica (molecular e morfológica), o estudo da biologia e também de armazenamento por meio de criopreservação em nitrogênio líquido (NL) de um isolado Heterorhabditis (isolado UEL 8) proveniente de área de pastagem, na região de Londrina, PR, Brasil Para isolamento do nematoide utilizou-se o método de “isca-viva” com lagartas de último instar de Galleria mellonella (Lepidoptera: Pyralidae) Para os estudos taxonômicos foi feita caracterização morfométrica por meio de microscopia de luz A identificação foi realizada a partir da amplificação da região ITS; além de estudos de filogenia com outras sequências já publicadas na literatura Posteriormente, realizou-se testes de patogenicidade sobre três diferentes insetos: lagartas de G mellonella, adultos de Dichelops melacanthus (Hemiptera: Pentatomidae) e larvas de Alphitobius diaperinus (Coleoptera: Tenebrionidae) Também foi determinado o ciclo de vida, avaliação da produção in vivo em lagartas de G mellonella e de criopreservação como um método de armazenamento para manutenção do isolado Observou-se que a sequência obtida para o isolado UEL 8 é idêntica com a sequência de referência de H amazonensis (DQ665222) Assim, pôde-se concluir por meio dos estudos morfológicos e moleculares que o nematoide isolado é da espécie H amazonensis Em relação ao teste de patogenicidade, concluiu-se que o nematoide foi patogênico aos três insetos, porém houve diferença na virulência, assim, lagartas de G mellonella e larvas de A diaperinus foram os insetos mais susceptíveis, com porcentagem de mortalidade de 1 e 85%, respectivamente No teste de produção in vivo foi possível observar que H amazonensis (UEL 8) produziu JIs ao longo de oito dias, com picos de produção no 1º e 2º dia e, a média da produção final por g/lagarta foi de 3 x 1³ JIs Com relação ao ciclo de vida, H amazonensis (UEL 8) apresentou dois ciclos de vida distintos, um curto (216h) e um longo (288h), produzindo duas gerações O ciclo curto foi observado na maior concentração (4 JIs/lagarta) No teste de criopreservação, H amazonensis (UEL 8) sobreviveu quando exposto ao glicerol em todas as concentrações testadas e não teve sua infectividade influenciada No entanto, após o congelamento em NL, observou-se baixa sobrevivência (6,5%) na concentração de 8% após 24 horas de congelamento, indicando que o glicerol, nas concentrações avaliadas não foi eficiente como crioprotetor para H amazonensis (UEL 8)