Desenvolvimento de qPCR para diagnóstico de Eimeria spp. em bovinos - Cardim, Sérgio Tosi (2018)
A coccidiose bovina é uma enfermidade de grande importância em rebanhos bovinos ao redor do mundo. Esta enfermidade é causada por protozoários, do gênero Eimeria e afeta principalmente animais com menos de 12 meses, sendo as espécies E. bovis e E. zuernii as de maior importância clínica, podendo causar diarréia severa com sangue em bezerros infectados. O diagnóstico de rotina desta doença é realizado através da observação morofológica dos oocisto, os quais precisam estar esporulados para identificação da espécie envolvida, o que leva em torno de 10 a 15 dias,tornando o mesmo muito laborioso e com necessidade de alto treinamento do leitor, dificuldando um diagnóstico mais rápido e consequente tratamento mais rápido dos animais. Devido as estes fatores, o objetivo deste trabalho foi desenvolver técnicas de qPCR para o diagnóstico do gênero Eimeria e das espécies de maior patogenia, E. bovis e E. zuernii. Para isto foram selecionados o gene 18S rRNA para o gênero Eimeria e o gene ITS-1 para diferenciação das espécies, isto porque o gene 18S tem pouca variabilidade entre as espécies enquanto o gene ITS-1 tem uma alta variabilidade interespecifica, com baixa variabilidade dentro da espécie, visando assim uma alternativa de diagnóstico mais rápida e sensível. As PCRs foram realizadas utilizando SYBR Green como fonte de fluorenscencia. Tanto os primers desenvolvidos para o gênero, quanto os desenvolvidos para a espécie E. zuernii apresentaram alta sensibilidade, tendo a capacidade de amplificar amostrar contendo apenas um oocisto do parasita. Já os primers desenvolvidos para E. bovis apresentaram uma sensibilidade inferior, sendo capazes de detectar positividade em amostras de campo contendo 50 oocistos por grama de fezes. Para avaliação da especificidade das técnicas foram utilizadas amostras contendo Cryptosporidium spp. e Giardia spp., sendo que todas as técnicas apresentaram negatividade tanto para Giardia spp., quanto para Cryptosporidium spp. Baseado nos resultados encontrados neste estudo, conclui-se que os primers desenvolvidos apresentaram alta sensibilidade e especificidade no diagnóstico de Eimeria em bovinos