Efeito da adição de EGF ou FSH no cultivo in vitro de folículos pré-antrais equinos inclusos em fragmentos ovarianos - Max, Marilu Constantino (2024)
Resumo: O objetivo do presente trabalho foi testar a adição de diferentes concentrações de FSH ou EGF ao meio de cultivo in vitro por 2 ou 6 dias sobre o desenvolvimento de folículos pré-antrais inclusos em fragmentos ovarianos equinos Para tanto foram realizados dois experimentos No primeiro foram testadas diferentes concentrações de EGF (1, 5, 1 e 2 ng/mL) adicionadas ao meio de cultivo in vitro durante 2 dias Já o segundo utilizou concentrações de FSH (1, 5, 1 e 2 ng/mL) por 2 ou 6 dias de cultivo O protocolo a seguir foi o mesmo para os dois experimentos, diferenciando apenas as moléculas (EGF ou FSH) testadas Ovários (n=5) de éguas em anestro sazonal foram coletados em abatedouro local Fragmentos (n=6 EGF; n=11 FSH) de tecido ovariano com aproximadamente 3x3x1 mm foram obtidos de cada animal Um fragmento foi imediatamente fixado e processado para análise histológica (grupo controle; Dia), o restante dos fragmentos foram colocados em PBS suplementado com penicilina (2 UI/mL) e estreptomicina (2 mg/mL) a 4° C durante 1 hora (período de transporte até o laboratório) Os fragmentos foram cultivados in situ durante 2 dias (D2) ou 6 dias (D6) em MEM+ ou MEM+ acrescido de concentrações diferentes de FSH ou EGF, criando os seguintes grupos para cada experimento: controle (D); MEM+ (D2); MEM+ (D6); MEM+ 1 ng/mL FSH ou EGF (D2); MEM+ 1 ng/mL de FSH (D6); MEM+ 5 ng/mL de FSH ou EGF (D2); MEM+ 5 ng/mL de FSH (D6); MEM+ 1 ng/mL de FSH ou EGF (D2); MEM+1 ng/mL de FSH (D6); MEM+ 2 ng/mL de FSH ou EGF (D2); e MEM+ 2 ng/mL de FSH (D6) Os folículos pré-antrais foram avaliados por microscopia óptica e classificados de acordo com a fase de desenvolvimento (primordial, e em desenvolvimento) e a sua morfologia (normal ou degenerado) O modelo estatístico utilizado foi Teste Exato de Fisher (p<,5) No total foram avaliadas 1637 lâminas contendo 5818 cortes histológicos Somente 13,85% dos cortes avaliados apresentavam folículos estando estes em diferentes fases de desenvolvimento No primeiro experimento, após 2 dias de cultivo, os grupos cultivados com 2 ng/mL de FSH, tal como a concentração 1 ng/mL no cultivo por 6 dias apresentaram as melhores taxas de folículos em desenvolvimento comparando-os aos demais tratamentos Em relação à integridade, os folículos pré-antrais na concentração de 1 ng/mL de FSH no cultivo por 2 dias e as concentrações de 5, 1 e 2 ng/mL de FSH no cultivo por 6 dias mostraram resultados superiores em relação ao restante dos grupos No segundo experimento, por dois dias de cultivo, as concentrações 1, 1 e 2 ng/mL de EGF proporcionaram melhores taxas de desenvolvimento folicular em comparação com os demais tratamentos (controle D, 5 e MEM+) Ao avaliar as taxas de folículos totais íntegros os tratamentos com 1 e 2 ng/mL de EGF obtiveram melhores resultados Desta maneira concluímos que a adição de FSH por 2 ou 6 dias ou EGF por 2 dias ao meio de cultivo in vitro de folículos pré-antrais equinos foram eficientes em promover o desenvolvimento e manter integridade folicular