Produção e caracterização da proteína c4299 de Trichuris trichiura como potencial imunomodulador - Santos, Priscila Souza dos (2018)
Diversos estudos utilizando helmintos e suas moléculas têm se baseado na imunomodulação gerada por esses parasitos, na busca de potenciais terapêuticos contra doenças alérgicas, inflamatórias e autoimunes. Nesse contexto, através da tecnologia do DNA recombinante é possível produzir proteínas desses organismos para a elucidação e caracterização dessas moléculas frente a doenças. Objetivo: Identificar a proteína c4299 de Trichuris trichiura (Trichuris_c4299) no extrato proteico de vermes adultos desse helminto e expressar de forma recombinante a proteína Trichuris_c4299 para caracterização imunogênica. Metodologia: Para identificação de Trichuris_c4299 no extrato do verme adulto Trichuris trichiura foi realizado a análise do proteoma por meio de espectrometria de massa acoplado à cromatografia liquida (LC/MS/MS) utilizando o Q-ExactiveTM mass spectrometer. A caracterização da proteína foi realizada primeiramente in silico através de análises de bioinformática e, para isso, foram feitas predições das característica físico-químicas utilizando diferentes ferramentas. O gene codificante de Trichuris_c4299 foi sintetizado por empresa especializada e clonado no vetor pET28a(+) de expressão. A proteína recombinante foi expressa em sistema procarioto e purificada através de cromatografia de afinidade acoplada a uma coluna de níquel HisTrap FF. A imunoreatividade de Trichuris_c4299 recombinante foi analisada por meio de ensaios imunológicos como ELISA e Dot Blot utilizando soro de pacientes infectados com Trichuris trichiura. Resultados: A partir da análise do proteoma foi possível a identificação de Trichuris_c4299 no extrato proteico de machos e fêmeas adultos de Trichuris trichiura. A análise de bioinformática possibilitou a predição de diversas características úteis de Trichuris_c4299 para a sua produção recombinante em Escherichia coli. Além disso, foi padronizado a expressão e purificação da proteína recombinante, e observou-se que a mesma apresentou reatividade no teste de ELISA e de Dot Blot, mostrando assim potencial imunogênico. Conclusão: Nesse trabalho foi possível determinar a presença de Trichuris_c4299 no proteoma dos vermes adultos de Trichuris trichiura e efetuar a padronização da expressão e purificação dessa proteína. Adicionalmente, observou-se que Trichuris_c4299 apresenta imunoreatividade em soro de pacientes infectados. Sendo assim, essa molécula se mostra um novo alvo para futuras investigações acerca de imunomodulação, seja para doenças alérgicas ou para outras doenças inflamatórias e autoimunes.