Utilização de um painel de proteínas recombinantes para o imunodiagnóstico da infecção por corynebacterium pseudotuberculosis em pequenos ruminantes

• Ano de defesa: 2018
• Autor(a) principal: Barral, Thiago Assis Doria
• Orientador(a): Nascimento, Roberto José Meyer , Portela, Ricardo Wagner Dias
• Banca de defesa: Nascimento, Roberto José Meyer , Vilas Bôas, Deise Souza, Souza, Barbara Maria Paraná da Silva, Portela, Ricardo Wagner Dias
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal da Bahia
• Programa de Pós-Graduação: Programa de Pós-Graduação em Imunologia - (PPGIM)
• Departamento: Instituto de Ciências da Saúde - ICS
• País: Brasil
• Palavras-chave em Português: Corynebacterium pseudotuberculosis; Caprinos; Imunoensaios; Ovinos
• Área do conhecimento CNPq: CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::IMUNOLOGIA::IMUNOLOGIA APLICADA
• Link de acesso: https://repositorio.ufba.br/handle/ri/35599

A linfadenite caseosa (LC) é uma doença de pequenos ruminantes que tem como agente infeccioso a bactéria Corynebacterium pseudotuberculosis, se caracteriza pela formação de lesões granulomatosas em linfonodos superficiais e internos, bem como em outros órgãos. A LC é encontrada em rebanhos por todo o mundo causando significativas perdas econômicas e, no entanto até o momento não existe um teste diagnóstico reunindo características satisfatórias tais como rapidez, baixo custo e alto grau de confiabilidade. O objetivo deste trabalho foi desenvolver um ELISA indireto para o diagnóstico da infecção por C. pseudotuberculosis em pequenos ruminantes, utilizando as proteínas PLD, CP40, PknG, DtxR e Grx de C. pseudotuberculosis, expressas em sistema recombinante. Foram analisados os perfis eletroforéticos dos antígenos expressos em sistema heterólogo procarioto por SDS-PAGE, e avaliado o seu reconhecimento em Dot Blot por soros de caprinos e ovinos comprovadamente infectados com a bactéria e também por amostras de animais provindos de área não endêmica. As proteínas recombinantes foram então empregadas em sistema checkerboard para padronização das condições do ELISA. Cento e trinta soros de caprinos e cento e sessenta soros de ovinos foram usados para obtenção dos parâmetros de validação do ensaio. As proteínas recombinantes foram reconhecidas por anticorpos de um pool de soros de animais infectados, e houve baixa reação quando utilizado pool de soros de animais controles negativos. O ELISA desenvolvido, usando uma combinação de PLD e CP40 para caprinos e somente a PLD para ovinos, foi capaz de discriminar animais positivos e negativos. Com sensibilidade de 95%, especificidade de 97,5% e acurácia de 99,3% para caprinos e 91% de sensibilidade, 98,7% de especificidade e 96,5% de acurácia para ovinos, respectivamente. Conclui-se então que estes ensaios de ELISA propostos podem ser utilizados com alto grau de confiança para o diagnóstico da infecção por C. pseudotuberculosis em pequenos ruminantes.