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Purificação e caracterização de uma nova substância com atividade anestésica local do veneno das glândulas parotóides do Bufo paracnemis

Detalhes bibliográficos
Ano de defesa: 1997
Autor(a) principal: Patrocínio, Manoel Cláudio Azevedo
Orientador(a): Carvalho, Krishnamurti de Moraes
Banca de defesa: Não Informado pela instituição
Tipo de documento: Dissertação
Tipo de acesso: Acesso aberto
Idioma: por
Instituição de defesa: Não Informado pela instituição
Programa de Pós-Graduação: Não Informado pela instituição
Departamento: Não Informado pela instituição
País: Não Informado pela instituição
Palavras-chave em Português:
Link de acesso: http://www.repositorio.ufc.br/handle/riufc/66935
Resumo: Amphibian skin has a diversity of substances, such as biogenic amines, alcaloids, steroids, proteins and peptides that evoke many pharmacological effects. In this study it was purified and characterized a factor with a local anesthetic activity. The venom extracted from Bufo paracnemis paratoid glands was dissolved in ethanol (1:5; w:v) and it was kept at 4 °C ovemight. Then the mixture was centrifugated at 5000 g for 5 minutes and the pellets were discarded. The supematant was fractionated by High Performance Liquid Chromatography (HPLC) using a C 18 column (2,5x30 cm) eluted with a flow of 7 ml/min with a gradient of 0-40% acetonitrile. The fractions were lyophilized for bioassay. A peak that presented motor paralysis after i.p. injection in mice was collected for further pharmacological studies. The fraction blocked comeal reflex in rabbit. This peak caused concentration dependent reduction in the rat phrenic nerve-diaphragm preparation. This inhibition was complete in high concentrations of the factor. The peak abolished the electrically evoked contraction on the longitudinal muscle of the mouse vas deferens. It decreased licking in the first phase and it abolished licking in the second phase of the formalin test in mice. The purity of this factor was also demonstrated by thin layer chromatography. There were performed infrared spectroscopy and mass spectrometry. The molecular weight was determined and it was 402 Da. Its structure belongs the family of the group of the steroids. It’s a bufogenin. It was made a structural proposition and nothing is known of the activity of this purified factor. In conclusion, the results presented in this study showed the total purification of a potent local anesthetic factor from Bufo paracnemis skin secretions that may be used in future human therapeutics.
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spelling Patrocínio, Manoel Cláudio AzevedoCarvalho, Krishnamurti de Moraes2022-07-06T12:20:44Z2022-07-06T12:20:44Z1997PATROCÍNIO, Manoel Cláudio Azevedo. Purificação e caracterização de uma nova substância com atividade anestésica local do veneno das glândulas parotóides do Bufo paracnemis. 1997. 118 f. Dissertação (Mestrado em Farmacologia) - Centro de Ciências da Saúde, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 1997. Disponível em: http://www.repositorio.ufc.br/handle/riufc/66935. Acesso em: 06/07/2022.http://www.repositorio.ufc.br/handle/riufc/66935Amphibian skin has a diversity of substances, such as biogenic amines, alcaloids, steroids, proteins and peptides that evoke many pharmacological effects. In this study it was purified and characterized a factor with a local anesthetic activity. The venom extracted from Bufo paracnemis paratoid glands was dissolved in ethanol (1:5; w:v) and it was kept at 4 °C ovemight. Then the mixture was centrifugated at 5000 g for 5 minutes and the pellets were discarded. The supematant was fractionated by High Performance Liquid Chromatography (HPLC) using a C 18 column (2,5x30 cm) eluted with a flow of 7 ml/min with a gradient of 0-40% acetonitrile. The fractions were lyophilized for bioassay. A peak that presented motor paralysis after i.p. injection in mice was collected for further pharmacological studies. The fraction blocked comeal reflex in rabbit. This peak caused concentration dependent reduction in the rat phrenic nerve-diaphragm preparation. This inhibition was complete in high concentrations of the factor. The peak abolished the electrically evoked contraction on the longitudinal muscle of the mouse vas deferens. It decreased licking in the first phase and it abolished licking in the second phase of the formalin test in mice. The purity of this factor was also demonstrated by thin layer chromatography. There were performed infrared spectroscopy and mass spectrometry. The molecular weight was determined and it was 402 Da. Its structure belongs the family of the group of the steroids. It’s a bufogenin. It was made a structural proposition and nothing is known of the activity of this purified factor. In conclusion, the results presented in this study showed the total purification of a potent local anesthetic factor from Bufo paracnemis skin secretions that may be used in future human therapeutics.A pele do anfíbios possui uma diversidade de substâncias, tais como aminas biogênicas, alcalóides, esteróides, proteínas e peptídios que suscitam muitos efeitos farmacológicos. Neste estudo, foi purificado e caracterizado um fator com uma atividade anestésica local. O veneno extraído das glândulas paratóides do Bufo paracnemis foi dissolvido em etanol (1:5; p:v). e foi mantido a 4 °C durante toda a noite. A mistura foi centrifugada a 5000 g por 15 minutos e o material precipitado foi descartado. O sobrenadante foi fracionado em HPLC (cromatografia líquida de alta performance), usando uma coluna C-18 (2,5x30 cm), eluído com um fluxo de 7 ml/min com um gradiente isocrático de acetonitrila a 40%. As frações foram liofilizadas para bioensaio. Um pico, que apresentou paralisia motora após injeção intraperitonial em camundongos, foi coletado para estudos farmacológicos. A fração purificada bloqueou o reflexo cómeo-palpebral em coelhos. Este pico causou redução concentração-dependente na preparação nervo frênico- diafragma de ratos. Esta inibição foi completa em altas concentrações do fator. O pico também aboliu a contração evocada eletricamente no músculo longitudinal do canal deferente de camundongos. O pico purificado diminuiu o tempo de lambida na primeira fase e aboliu este tempo na segunda fase do teste da formalina em camundongos. O grau de pureza do material foi demonstrado por cromatografia de camada delgada. Foram executadas espectroscopia de infravermelho e espectrometria de massas. O peso molecular do material foi determinado, com valor de 402 Da. Sua estrutura pertence a família do grupo dos esteróides; é uma bufogenina. Foi determinada uma proposição estrutural do fator e não há relatos na literatura de atividade anestésica local deste fator purificado. Em conclusão, os resultados apresentados neste estudo mostram a total purificação de um potente fator com atividade anestésica local das secreções da pele do Bufo paracnemis, que poderá ser usado com fins terapêuticos em seres humanos.Preparações FarmacêuticasAcetonitrilasAlcaloidesAminas BiogênicasPurificação e caracterização de uma nova substância com atividade anestésica local do veneno das glândulas parotóides do Bufo paracnemisinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisporreponame:Repositório Institucional da Universidade Federal do Ceará (UFC)instname:Universidade Federal do Ceará (UFC)instacron:UFCinfo:eu-repo/semantics/openAccessLICENSElicense.txtlicense.txttext/plain; charset=utf-82152http://repositorio.ufc.br/bitstream/riufc/66935/2/license.txtfb3ad2d23d9790966439580114baefafMD52ORIGINAL1997_dis_mcapatrocínio.pdf1997_dis_mcapatrocínio.pdfapplication/pdf4503315http://repositorio.ufc.br/bitstream/riufc/66935/1/1997_dis_mcapatroc%c3%adnio.pdf82866bc4357349daec24ea27732b588bMD51riufc/669352022-07-06 09:21:54.663oai:repositorio.ufc.br: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Repositório InstitucionalPUBhttp://www.repositorio.ufc.br/ri-oai/requestbu@ufc.br || repositorio@ufc.bropendoar:2022-07-06T12:21:54Repositório Institucional da Universidade Federal do Ceará (UFC) - Universidade Federal do Ceará (UFC)false
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