Avaliação do fenótipo metabólico tumoral da linhagem metastática gástrica agp-01 - Silva, Emerson Lucena (2020)
O câncer gástrico (CG) é tido como um grande problema de saúde pública mundial por possuir altos níveis de incidência e mortalidade. Dentre as características associadas ao desenvolvimento do câncer, a reprogramação metabólica envolve a capacidade que a célula tumoral tem em modificar ou reprogramar seu metabolismo em diferentes condições, e assim, fornecer energia para suportar sua proliferação desordenada. Dessa forma, o objetivo desse trabalho é, primeiramente, avaliar o perfil metabólico de três linhagens tumorais gástricas (AGP-01, ACP-03 e ACP-02) e uma não neoplásica gástrica (MNP-01) quando cultivadas em diferentes condições de glicose e, posteriormente, estudar os mecanismos celulares e moleculares envolvidos na reprogramação metabólica da linhagem gástrica metastática AGP-01. Para avaliação do perfil metabólico, foram realizados os ensaios de viabilidade, consumo de glicose e atividade de LDH em três condições de cultivo (25, 5,5 e 0,5 mM de glicose). Em relação a viabilidade celular, foi observado uma diminuição em todas as linhagens analisadas apenas quando cultivadas em 0,5 mM de glicose, sendo os percentuais de viabilidade de aproximadamente 87%, 86%, 47% e 70% para as linhagens AGP-01, ACP-03, ACP-02 e MNP-01, respectivamente. Em relação ao consumo de glicose, foi visualizado que quando cultivadas em 0,5 e 5,5 mM, as linhagens AGP-01 e ACP-03 apresentaram maior atividade metabólica. Já em meio com 25 mM de glicose, as linhagens ACP-03 e ACP-02 apresentaram maior consumo de glicose. As linhagens AGP-01 e ACP-03 não apresentaram redução na atividade enzimática da LDH. Os resultados demonstram que as linhagens AGP-01 e ACP-03 apresentam um perfil metabólico glicolítico aeróbico, sendo a linhagem metastática AGP-01 escolhida para os demais ensaios. Foi observado que quando cultivada em 0,5 mM de glicose, a linhagem AGP-01 apresentou aumento de células em Sub-G1 (fragmentação celular), parada de ciclo em G0/G1, modificações morfológicas típicas de processo apoptótico, aumento de marcação com iodeto de propídio, de despolarização mitocondrial e da concentração de espécies reativas de oxigênio (EROS), diminuição na migração e na atividade de metaloproteinase (MMP) 9, assim como aumento na expressão de GLUT1, GAPDH, LDHA, HPRT1, HIF1 e TP53. Já a linhagem AGP-01 quando cultivada em 5,5 mM apenas apresentou aumento no número de colônias e na expressão dos genes HK1, GLUT1, GAPDH, LDHA, HPRT1, HIF1, C-Myc e TP53, enquanto os outros parâmetros avaliados não mostraram diferenças significativas quando comparados a linhagem cultivada a 25 mM de glicose. Dessa forma, com o presente estudo foi observado o perfil metabólico glicolítico aeróbico da linhagem AGP-01, assim como suas modificações fenotípicas em meios com diferentes concentrações de glicose. Em condições fisiológicas de glicose (5,5 mM) a linhagem apresenta aumento no perfil proliferativo ligado a aumento na expressão de enzimas relacionadas a vias biossintéticas celulares.