Desenvolvimento de metodologia analítica para determinação de anfetamina, metanfetamina e famprofasona em sangue e fígado após administração controlada de famprofasona em suínos - Silva, Cassia Maria Lins da (2018)
Na pesquisa toxicológica forense as matrizes biológicas usadas, tanto podem ser coletadas de indivíduos vivos quanto após a morte, e a preparação da amostra biológica é um fator crítico do processo analítico. Os procedimentos são específicos tanto para o agente pesquisado como para a matriz utilizada. Outra questão é a interpretação dos resultados, além dos fenômenos post-mortem, envolvidos na literatura, há poucos estudos de correlação entre os valores sanguíneos e demais tecidos. Esse estudo propôs desenvolver um método de preparo de amostras para posterior doseamento de anfetamina, metanfetamina e famprofasona em amostras de fígado e sangue, e aplica-lo em amostras autênticas coletadas de suínos após administração controlada de famprofasona. Neste estudo foram avaliadas as seguintes etapas: (1) dispersão celular, através do uso de colagenase, de modo a aumentar a superfície de contato na etapa de extração; (2) procedimento de remoção de proteínas das amostras; (3) extração/clean-up dos analitos; (4) desenvolvimento e validação de método cromatográfico e (5) experimentos in vivo e análise de amostras reais. A dispersão celular foi de 92,8±0,9 % da massa com 91,0±1,2 % do colágeno hidrolisado nas condições propostas. Na otimização do procedimento enzimático, foi necessário desenvolver um procedimento rápido, simples, e adequado de modo a avaliar-se a eficiência do processo de dispersão. Com a desproteinização das amostras, em estudo, foram obtidos aproximadamente 91 % de remoção proteica, com ZnSO4 (6% m/v), e 95 % para a mistura equimolar de Na3Cit/AlCl3 (0,7 mol L-1). Para a LC-MS ficou definido como solução A, uma solução de ácido fórmico a 0,015 %, e acetonitrila com 0,015 % de ácido fórmico como solução B, com eluição no modo de gradiente com um tempo total de 12 min. Após a otimização do procedimento de extração por SPE, o desproteinizante Na3Cit/AlCl3 foi selecionado por apresentar maior recuperação para todos os analitos em ambas matrizes, principalmente para a famprofasona com uma diferença entre os valores percentuais de recuperação de aproximadamente 21 e 27 %, para o sangue e fígado, respectivamente. O método foi validado, e apresentou limite detecção igual a 5 ng g-1 para os três analitos no fígado. Enquanto que para o sangue, obteve-se 0,6 ng mL-1 para a anfetamina e 1,0 ng mL-1 para a metanfetamina e famprofasona. Os limites de quantificação dos três analitos ficaram em 5 ng g-1 para o fígado e 1,0 ng mL-1 para o sangue. Os dados das curvas analíticas da metanfetamina em fígado foram os únicos a apresentar homocedasticidade, e a faixa de trabalho selecionada foi de 5 a 150 ng g-1. Para as curvas analíticas de anfetamina e famprofasona em fígado e, de anfetamina, famprofasona e metanfetamina em sangue que apresentaram comportamento heterocedástico, procedeu-se com a transformação dos dados para o formato de logX e logY. No fígado, a faixa de concentração de trabalho, para a anfetamina ficou entre 5 e 200 ng g-1, e para a famprofasona entre 5 e 150 ng g-1. Para o sangue, o intervalo de concentração ficou entre 1 e 40 ng mL-1 para a anfetamina e metanfetamina, e de 1 a 50 ng mL-1 para a famprofasona. A avaliação da precisão nos três níveis de concentração, através da repetibilidade e precisão intermediária, apresentou resultados de coeficientes de variação menores que 6 % e valores de erro relativo menores que 8 % no fígado para os três analitos. No sangue os valores foram abaixo de 11 % para o coeficiente de variação e menores que 7 % para o erro relativo para os três analitos. Em relação a exatidão nos três níveis de concentração no fígado, os valores ficaram abaixo de 14 % para os três analitos. No sangue, os valores foram inferiores a 10 % para os três analitos. O método foi aplicado a amostras reais, obtidas de um único indivíduo, que recebeu 200 mg de famprofasona por dia, por um período de cinco dias, e duas horas antes do abate