Inovação do uso da metodologia automatizada de citologia em meio líquido para a avaliação da expressão da proteína ki-67 através da imunocitoquímica e aspectos morfológicos nucleares de fibroblastos cultivados in vitro - Devillart, Talita Alves do Nascimento Santos (2022)
Introdução: A proteína Ki-67 é um biomarcador útil para avaliar o índice de proliferação celular, com valor prognóstico e preditivo já descrito para algumas neoplasias. Seus padrões morfológicos de imunorreatividade podem ser associados às fases do ciclo celular, porém a exata localização desta proteína em cada fase do ciclo ainda precisa ser mais detalhada. A análise da expressão de proteínas durante o ciclo pode ser realizada através da imunofluorescência de células cultivadas e sincronizadas. O uso de um método automatizado de citologia em meio líquido associado à imunocitoquímica pode aperfeiçoar a análise dessa expressão, uma vez que permite a visualização de detalhes morfológicos nucleares e da expressão da proteína simultaneamente. Hipótese: A metodologia automatizada de citologia em meio líquido é aplicável para a avaliação da expressão da proteína Ki-67 através da imunocitoquímica e aspectos morfológicos nucleares de fibroblastos cultivados in vitro. Objetivo geral: Comprovar que a utilização da metodologia automatizada de citologia em meio líquido é aplicável à cultura de fibroblastos para avaliação da proteína Ki-67 por imunocitoquímica e aspectos morfológicos nucleares de fibroblastos. Material e Métodos: Fibroblastos ATCC®SCRC-1041™ foram cultivados e sincronizados através do seguinte protocolo duplo de sincronização: na fase G0 por privação de soro e na fase G1/S usando bloqueio único de timidina (2mM) por 16 h. O processamento automatizado em meio líquido foi realizado usando a plataforma Thinprep®. Aspectos citomorfológicos foram avaliados através da coloração Papanicolaou e a expressão da proteína Ki-67 por imunocitoquímica.Em paralelo, foram cultivados fibroblastos sobre lamínulas e avaliada a expressão da proteína Ki-67 por imunofluorescência. Resultados: O processamento automatizado preservou a morfologia celular e aprimorou a análise da expressão da proteína Ki-67. Fibroblastos não privados de soro apresentaram a maioria dos núcleos imunopositivos para Ki-67, com padrões granular puntiforme, granular difuso, nodular e marcação fraca, já as células privadas de soro foram predominantemente negativas (>95%). Nos períodos 6 h e 12 h após reestimulação sérica, observamos os padrões de marcação fraca, nodular e granular puntiforme. Após o tratamento com timidina observamos os padrões granular puntiforme,nodular e granular difuso, com um maior número de células positivas do que nos momentos iniciais após a restituição do soro. Conclusão: O uso da metodologia automatizada de citologia em meio líquido em fibroblastos cultivados in vitro permite avaliar com detalhes os aspectos morfológicos da expressão da proteína Ki-67 por imunocitoquímica e a morfologia celular se corados por Papanicolaou. O protocolo para abordagem por dupla metodologia é adequado para avaliar expressão da proteína Ki-67 por imunofluorescência e imunocitoquímica. Existem padrões diferentes de expressão da proteína Ki-67 em fibroblastos cultivados in vitro, porém não podem ser associados às fases do ciclo celular com a metodologia utilizada