Avaliação do efeito anti-inflamatório e anti-proliferativo de Condroitim sulfato e/ou Glucosamina em células RAW 264.7, IEC-6 e Caco-2

Detalhes bibliográficos
Ano de defesa: 2019
Autor(a) principal: Oliveira, Luiz Gustavo de lattes
Orientador(a): Chebli, Julio Maria Fonseca lattes
Banca de defesa: Ribeiro, Tarsila Campanha da Rocha, Caneschi, César Augusto, Soares, Roberta Reis, Gomes, Kátia das Neves
Tipo de documento: Tese
Tipo de acesso: Acesso aberto
Idioma: por
Instituição de defesa: Universidade Federal de Juiz de Fora (UFJF)
Programa de Pós-Graduação: Programa de Pós-graduação em Saúde Brasileira
Departamento: Faculdade de Medicina
País: Brasil
Palavras-chave em Português:
Área do conhecimento CNPq:
Link de acesso: https://repositorio.ufjf.br/jspui/handle/ufjf/11167
Resumo: Condroitim sulfato (CS) e Glucosamina (GlcN) são atualmente indicados para o tratamento de doenças inflamatórias, como osteoartrite, por reduzir em condrócitos a ação do fator de transcrição nuclear NF-kB, atividade de metaloproteinases (MMP), interleucinas, óxido nítrico sintase induzível (iNOS) entre outros mediadores inflamatórios. O objetivo do presente trabalho, foi investigar os efeitos de CS, GlcN e CS/GlcN sobre modelo de inflamação agudo induzido por lipopolissacarídio (LPS) em linhagens celulares RAW 267.4, IEC-6 e Caco-2) bem como entender o mecanismo molecular deste efeito sobre essas linhagens celulares. CS, GlcN e CS/GlcN, foram caracterizados pordiferentes métodos, entre eles, eletroforese em gel de agarose e em gel de poliacrilamida, fluorophore-assisted carbohydrate electrophoresis (FACE), e 13C RMN. A atividade anti-inflamatória de CS e GlcN associados ou não foi avaliada pela produção de óxido nítrico (NO), atividade de metaloproteases (MMP-9 e -2), liberação de TNF-a, IL-6 e IL-1b por ELISA. Além do deslocamento nuclear do NF-kB por microscopia confocal de imunofluorescência e expressão de IL-1b e iNOS. As análises demonstraram que o CS utilizado nos testes é caracterizado por ser do tipo 4 sulfatado. CS, GlcN e CS/GlcN foram capazes de reduzir a expressão de iNOS e a produção de NO, além de reduzir os níveis de produção de TNF-a nos macrófagos RAW 264.7. Já CS/GlcN e GlcN reduziram a atividade de MMP-9, e a produção de IL-1b, mantendo uma maior expressão de proIL-1b. CS, GlcN e CS/GlcN também diminuiram o deslocamento nuclear do fator de transcrição NF-kB. Dessa forma, esses resultados indicam que CS e GlcN associados ou não apresentam uma atividade anti-inflamatória frente à macrófagos RAW 264.7. Com relação à resposta dos compostos estudados frente as células IEC-6 e Caco-2, não foi possível avaliar nas condições disponíveis, uma vez, que foi possível estimular um processo inflamatório nas mesmas.
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CS, GlcN e CS/GlcN, foram caracterizados pordiferentes métodos, entre eles, eletroforese em gel de agarose e em gel de poliacrilamida, fluorophore-assisted carbohydrate electrophoresis (FACE), e 13C RMN. A atividade anti-inflamatória de CS e GlcN associados ou não foi avaliada pela produção de óxido nítrico (NO), atividade de metaloproteases (MMP-9 e -2), liberação de TNF-a, IL-6 e IL-1b por ELISA. Além do deslocamento nuclear do NF-kB por microscopia confocal de imunofluorescência e expressão de IL-1b e iNOS. As análises demonstraram que o CS utilizado nos testes é caracterizado por ser do tipo 4 sulfatado. CS, GlcN e CS/GlcN foram capazes de reduzir a expressão de iNOS e a produção de NO, além de reduzir os níveis de produção de TNF-a nos macrófagos RAW 264.7. Já CS/GlcN e GlcN reduziram a atividade de MMP-9, e a produção de IL-1b, mantendo uma maior expressão de proIL-1b. CS, GlcN e CS/GlcN também diminuiram o deslocamento nuclear do fator de transcrição NF-kB. Dessa forma, esses resultados indicam que CS e GlcN associados ou não apresentam uma atividade anti-inflamatória frente à macrófagos RAW 264.7. Com relação à resposta dos compostos estudados frente as células IEC-6 e Caco-2, não foi possível avaliar nas condições disponíveis, uma vez, que foi possível estimular um processo inflamatório nas mesmas.Chondroitin Sulfate (CS) and Glucosamine (GlcN) are currently indicated for the treatment of inflammatory diseases, such as osteoarthritis, by reducing the action of nuclear transcription factor NF-kB, metalloproteinase activity (MMP), interleukins, nitric oxide synthase inducible (iNOS) among other inflammatory mediators. The objective of the present study was to investigate the effects of CS, GlcN,and CS/GlcN on the model of acute inflammation induced by lipopolysaccharide (LPS) in cell lines RAW 267.4, IEC-6 and Caco-2, as well as, to understand the molecular mechanism of this effect on macrophages RAW 264.7, IEC-6 and Caco-2. CS and GlcN were characterized by agarose gel electrophoresis, polyacrylamide gel for molecular weight, fluorophore-assisted carbohydrate electrophoresis (FACE), and 13C NMR. The anti-inflammatory activity of CS and GlcN associated or not was evaluated by the production of nitric oxide (NO), metalloproteinases activity (MMP-9 and -2), TNF-a, IL-6 and IL-1b by ELISA. In addition, translocation of NF-κB by confocal immunofluorescence microscopy, and expression of IL-1b and iNOS. The analyzes showed that the CS used in the tests is characterized as a chondroitin 4sulfate. CS, GlcN and CS/GlcN were able to reduce iNOS expression and NO production. In addition to reducing levels of TNF-a in RAW 264.7 macrophages. Already CS/GlcN and GlcN reduced the activity of MMP-9, and the production of IL1b, maintaining a higher pro-IL-1b expression. Cs, GlcN and CS/GlcN also decreased the nuclear translocationt of the NF-kB. Thus, these results indicate that CS and GlcN associated or not, present an anti-inflammatory activity against RAW 264.7 macrophages. With regard to the response of the compounds studied to IEC-6 and Caco-2 cells, it was not possible to evaluate in the available conditions, once, that we can not stimulate an inflammatory process in them.CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e TecnológicoporUniversidade Federal de Juiz de Fora (UFJF)Programa de Pós-graduação em Saúde BrasileiraUFJFBrasilFaculdade de Medicinahttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/br/info:eu-repo/semantics/openAccessCNPQ::CIENCIAS DA SAUDE::MEDICINAAnti-inflamatórioCondroitim sulfatoGlucosaminaRAW 264.7LipopolissacarídeoNF-kBAnti-inflammatoryChondroitin sulfateGlucosamineRAW 264.7LipopolysaccharideNF-kBAvaliação do efeito anti-inflamatório e anti-proliferativo de Condroitim sulfato e/ou Glucosamina em células RAW 264.7, IEC-6 e Caco-2info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesisreponame:Repositório Institucional da UFJFinstname:Universidade Federal de Juiz de Fora (UFJF)instacron:UFJFCC-LICENSELICENSElicense.txtlicense.txttext/plain; charset=utf-81748https://repositorio.ufjf.br/jspui/bitstream/ufjf/11167/1/license.txt8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33MD51ORIGINALluizgustavodeoliveira.pdfluizgustavodeoliveira.pdfapplication/pdf60292258https://repositorio.ufjf.br/jspui/bitstream/ufjf/11167/2/luizgustavodeoliveira.pdf6ee492fa9a46c337d3fad74d14b3d5f6MD52TEXTluizgustavodeoliveira.pdf.txtluizgustavodeoliveira.pdf.txtExtracted texttext/plain157https://repositorio.ufjf.br/jspui/bitstream/ufjf/11167/3/luizgustavodeoliveira.pdf.txt8486ba8fa6f53a61d34d1555853b2366MD53THUMBNAILluizgustavodeoliveira.pdf.jpgluizgustavodeoliveira.pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg1197https://repositorio.ufjf.br/jspui/bitstream/ufjf/11167/4/luizgustavodeoliveira.pdf.jpg1b69d7b060cc46cb480479e7a3c34f60MD54ufjf/111672022-08-16 03:07:31.712oai:hermes.cpd.ufjf.br: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Repositório InstitucionalPUBhttps://repositorio.ufjf.br/oai/requestopendoar:2022-08-16T06:07:31Repositório Institucional da UFJF - Universidade Federal de Juiz de Fora (UFJF)false
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