Resposta adaptativa de células planctônicas e sésseis de Salmonella Enteritidis ao óleo essencial de cravo, eugenol, quaternário de amônio e ácido lático - Coelho, Mariana Silva (2017)
A contaminação de superfícies e alimentos por microrganismos deterioradores e patogênicos como Salmonella sp. é uma preocupação na indústria de alimentos. Os óleos essenciais e seus componentes majoritários têm demonstrado atividade antimicrobiana sobre esses microrganismos. Eles podem modificar as características sensoriais dos alimentos aos quais são adicionados no intuito de preservá-los. Diante disso, esses antimicrobianos vêm sendo utilizados em conjunto com outras barreiras, para que sejam utilizados em menores quantidades, o que faz com que eles possam ser encontrados em concentrações subletais. Assim, as características fisiológicas desses microrganismos podem conferir resistência aos agentes antimicrobianos, como, por exemplo, aos sanificantes utilizados nos procedimentos de higienização ou aos antimicrobianos utilizados na conservação de alimentos. Esta frequente exposição a concentrações subletais pode levar ao aparecimento de microrganismos mais resistentes. Neste contexto, este estudo foi realizado com o objetivo de avaliar a adaptação de células planctônicas e sésseis de Salmonella enterica sorovar Enteritidis ao óleo essencial de cravo, seu componente majoritário eugenol, ao quaternário de amônio e ao estresse ácido. Para a avaliação da adaptação das células planctônicas, primeiramente, foi realizada a análise das concentrações mínimas bactericidas (CMB) do óleo essencial de cravo e de seu componente majoritário eugenol nas concentrações de 0,5; 0,9; 1,9; 3,9; 7,8; 15,6; 31,2 e 62,5 mg.mL-1 e do quaternário de amônio nas concentrações de 0,1; 0,2; 0,5; 0,9; 1,9 mg.mL-1, que foram determinadas empregando-se a técnica de microdiluição em caldo em placas de poliestireno de 96 cavidades e incubados, a 37 °C, por 24 horas. Para a avaliação da adaptação das células sésseis, primeiramente foi realizada a análise da CMB do óleo essencial de cravo e de seu componente majoritário eugenol nas concentrações de 10; 20; 30; 40; 50; 60; 70 e 80 mg.mL-1 e do quaternário de amônio nas concentrações de 30; 40; 50; 60; 70; 80; 90 e 100 mg.mL-1, que foram determinadas empregando-se a técnica de microdiluição em caldo em placas de poliestireno de 96 cavidades e incubados, a 37 °C, por 48 horas. Em todo o experimento os antimicrobianos foram homogeneizados em caldo BHI, adicionado de 0,5% (v/v) de Tween 80. Para a adaptação das células planctônicas, utilizou-se a concentração subletal de 1/8 CMB dos antimicrobianos, a 37 °C, por 6 horas. Para adaptação das células sésseis utilizou-se a concentração subletal de 1/8 CMB dos antimicrobianos das células planctônicas, a 37 °C, por 48 horas. Para a indução de resistência direta das células planctônicas, ou seja, submetidas à concentração subletal e, posteriormente, expostas ao mesmo antimicrobiano, não foi observada a adaptação, tendo as CMB se mantido as mesmas. Entretanto, foi observada adaptação cruzada de S. Enteritidis entre o óleo essencial de cravo e eugenol ao pH, e os microrganismos passaram a crescer em pH 4,5 e 5,0, respectivamente. Também foi observada a adaptação cruzada entre o componente majoritário eugenol e o sanificante quaternário de amônio. Para a indução de resistência direta e cruzada das células sésseis foi observada a adaptação ao eugenol, tendo sua concentração mínima bactericida do biofilme (CMBB) passado de 30 para 40 mg.mL-1, para ambos os casos. Pode concluir-se que esses antimicrobianos podem ser utilizados na indústria de alimentos, mas medidas preventivas devem ser utilizadas para que o microrganismo não seja submetido a concentrações subletais desses antimicrobianos, devido à aquisição de tolerância cruzada.