Estudo bioquímicos e imunológicos das proteínas Pb28 e Pb 27r do fungo Paracoccidioídes brasiliensis

• Ano de defesa: 2007
• Autor(a) principal: Bernardo Sgarbi Chaves Reis
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal de Minas Gerais; UFMG
• Palavras-chave em Português: Paracoccidioides brasiliensis; Bioquímica
• Link de acesso: http://hdl.handle.net/1843/CMFC-78PLFL

Aparacoccidioidomicose (PCM) é uma doença sistêmica, granulomatosa eendêmica da América Latina, cujo agente etiológico éo fungoParacoccidioides brasiliensis. O diagnóstico da infecção é,principalmente,realizado por biópsia do tecido acometido. Diversos pesquisadores têmvoltado sues esforços na tentativa de isolar antígenos capazes dediagnosticar, sorologicamente, pacientes comPCM, assimcomo desencadearuma resposta protetora à infecção. Oantígeno Mexo,obtido a partir daP. brasiliensis foicapaz deextração das proteínas extracelulares do fungodiscriminar pacientes comPCM de indivíduos não infectados comsensibilidade de 100%. Alémdisso, pacientes emtratamento diminuemounão mais reconhecemantígenos presentes no Mexo. Uma proteína de 28 kDa(Pb28), presente no Mexo,foireconhecida por100% dos soros de pacientescomPCM testados.Essa proteína se mostrou altamente específica àinfecção, não sendo reconhecida pornenhumdos soros depacientes cominfecções diversas testados. APb28 foipurificada porFPLC e HPLC e aseqüência de sua região N-terminaldeterminada. As análises de homologia esimilaridade embancos de dados demonstraramque a Pb28 corresponde a umP. brasiliensis. Utilizando a mesma estratégia de purificaçãonovo antígeno de sequenciamento da região N-terminal, uma outra proteína dtambémreconhecida por soro de pacientes comPCM, foiidentificada. Essaproteína foicaracterizada como sendo o antígeno de 27 kDa do fungo(U41503.1), até então uma proteína hipotética, e denominada de Pb27r. Aseqüência de DNAcodificadora para a proteína Pb27r foiamplificada, clonadexpressa emsistema de expressão pGEX-4T-2.Estudosimunológicos coma Pb27r purificada demonstraramque essa proteína éaltamente sensível(80,5%) e específica (100%) àPCM emensaios de ELISAcomsoros humanos. Ela ainda foicapaz de induzir resposta imunológicaprotetora,comalta produção deIgG2b, emcamundongos Balb/C imunizadoscoma proteína e infectados como isolado virulento do fungo,Pb18. Estudosbioquímicos da Pb27r determinarama presença de 31,0% deestruturas -hélices;10,7% deestruturas folha-ß antiparalelas;9,0% deestruturas folha-ß paralelas ;17,3% deestruturas ß-Turn;32,4%de estruturas randômicas.Anticorpos Anti-Pb27r foramcapazes de localizar a proteína Pb27r nasuperfície do fungo.Esses resultados demonstramque ambas proteínas aquiestudas, Pb28 e Pb27r,têmcapacidade de discriminar pacientes comPCMpodendo serutilizadas emensaios de imunodiagnóstico e, a Pb27r podetambémser usada na confecção de vacina contrao fungo.