Preparação e Caracterização de Nanocápsulas Furtivas e Sítio-específicas Para o Tratamento do Câncer - Ferraz, Milena Sales (2013)
O presente estudo objetivou sintetizar um polímero sítio-específico de ácido d,l-láctico e glicólico (PLGA) conjugado ao polietileno glicol (PEG) e ao folato (FOL), desenvolver nanocápsulas furtivas e sítio-específicas contendo β-lapachona (β-lap), validar um método analítico simples, rápido e específico para quantificação da β-lapachona em plasma de ratos através da cromatografia líquida de alta eficiência e analisar o perfil farmacocinético da β-lap encapsulada em nanocápsulas em comparação ao fármaco livre. Primeiramente, o PLGA-PEG-FOL foi sintetizado com um percentual de conjugação de 97% e caracterizado por espectroscopia ¹H RMN e FTIR. A -lapachona foi encapsulada em nanocápsulas convencionais (NC/lap), PEGuiladas (NC-PEG/lap) e sítio-específicas (NC-FOL/lap), as quais foram preparadas pelo método de deposição interfacial de polímero pré-formado. As nanocápsulas foram caracterizadas por tamanho de partícula, índice de polidispersão, eficiência de encapsulação, potencial zeta e estudo de cinética de liberação in vitro. Os resultados demonstraram que o método de preparação permitiu a formação de nanocápsulas sítio-específicas nanométricas, monodispersas e com uma alta eficiência de encapsulação do fármaco. Uma redução do potencial zeta em módulo foi observada nas NC-PEG/lap e NC-FOL/lap em relação às NC/lap, provavelmente devido à presença do PEG e folato na superfície destes sistemas. Uma liberação de -lapachona em torno de 80% a partir das nanocápsulas foi alcançada em 24 h. No estudo de citotoxicidade celular frente às linhagens celulares KG-1 e HeLa, as nanocápsulas sítio-específicas exibiram um efeito antiproliferativo relevante quanto comparados ao fármaco livre. Para a validação do método analítico, empregou-se cromatografia em fase reversa com fase móvel constituída por mistura de metanol e água (80:20, v/v), a um fluxo de 0,9 mL/min. Os analitos foram detectados por UV a 256 nm. A β-lapachona foi extraída das amostras de plasma após adição de metanol. O tempo de retenção foi de 4,5 min. Este método apresentou linearidade na faixa de concentração entre 0,5-16 g/mL ( r = 0,9996), com limite de quantificação de 0,2 g/mL e exatidão de aproximadamente 100%. O método analítico desenvolvido neste trabalho demonstrou especificidade, linearidade, precisão e exatidão. O perfil farmacocinético das NC-FOL/-lap foi avaliado e comparado ao da -lap livre, após injeção intraperitoneal (i.p.) em ratos. Os parâmetros farmacocinéticos foram estimados por uma abordagem não-compartimental utilizando equações clássicas. Neste estudo, as nanopartículas mostraram alterações significativas no perfil farmacocinético das NC-FOL/-lap. Diante dos resultados obtidos, sugere-se que as nanocápsulas PEGuiladas e sítio-específicas contendo -lapachona poderão proporcionar um maior benefício terapêutico através de sistemas de longa duração e específico para células cancerosas.