Desenvolvimento de proposta de monografia farmacopeica de inflorescências de Cannabis sativa L. - Souza, Maira Ribeiro de (2022)
A espécie vegetal Cannabis sativa L. tem acompanhado o desenvolvimento da humanidade desde os seus primórdios, sendo utilizada para diversas finalidades e em diversos contextos socioculturais, destacando-se as aplicações terapêuticas e medicinais. Ao longo do século XX, no entanto, diversos controles e restrições sobre as atividades envolvendo a espécie foram estabelecidos internacionalmente. Apesar disso, o uso medicinal da Cannabis e de seus derivados tem ganhado interesse nas últimas décadas, especialmente por pacientes com doenças debilitantes e refratários às alternativas terapêuticas existentes. Como consequência, diversos modelos regulatórios têm sido desenvolvidos ao redor do mundo a fim de possibilitar o acesso à espécie para fins medicinais. No Brasil, o marco regulatório referente a esse tema tem evoluído notavelmente desde 2015, embora vários aspectos ainda estejam pendentes de regulamentação. Diante disso, nota-se a necessidade de definição de especificações de qualidade relevantes de modo a reduzir os riscos associados ao uso dos produtos da Cannabis e possibilitar a caracterização adequada de medicamentos a serem avaliados em estudos clínicos. Nesse contexto, a aplicação de ferramentas de Qualidade Analítica por Design (AQbD, sigla em inglês), incluindo os desenhos experimentais (DoE, sigla em inglês), pode permitir contornar os desafios analíticos envolvidos na obtenção de métodos adequados a tais finalidades. Diante do exposto, o presente estudo teve como objetivo desenvolver métodos analíticos e especificações aplicados ao controle da qualidade de inflorescências de C. sativa, a fim de possibilitar a elaboração de uma monografia a ser incluída na Farmacopeia Brasileira. Também foi elaborada uma revisão dos principais marcos regulatórios referentes ao uso medicinal da espécie ao redor do mundo, com o intuito de contribuir para a evolução futura do marco regulatório nacional, com ênfase na definição de critérios técnicos e de qualidade harmonizados com os já aplicados em outros países. Em relação às especificações de qualidade, foram propostos critérios referentes à identificação botânica macroscópica e microscópica do material de interesse, com a elaboração de ilustrações pertinentes, a serem incluídas na proposta de monografia. Além disso, um método por cromatografia em camada delgada (TLC, sigla em inglês) também foi proposto para a identificação e monitoramento do perfil cromatográfico do material vegetal. Para tanto, um estudo para otimização da fase móvel foi conduzido com aplicação de um desenho experimental de mistura. As condições otimizadas possibilitaram a obtenção de cromatogramas que refletem o perfil de canabinoides majoritários das amostras, além de permitir a discriminação entre os principais quimiotipos da espécie. O método foi validado em relação à sua seletividade, precisão e robustez. Por fim, um método por cromatografia em fase líquida de alta eficiência com detecção por arranjo de diodos (HPLC-DAD, sigla em ingês) foi proposto para quantificação simultânea de cinco canabinoides majoritários (ácido canabidiólico, canabidiol, ácido tetraidrocanabinólico, Δ9- tetraidrocanabinol e canabinol) em inflorescências de C. sativa. O processo de desenvolvimento analítico envolveu a aplicação de uma abordagem orientada por AQbD. As variáveis experimentais críticas relativas ao preparo da amostra e às condições cromatográficas foram otimizadas utilizando a Metodologia de Superfície de Resposta (RSM, sigla em inglês). A aplicação das condições experimentais otimizadas possibilitou a resolução de 12 canabinoides no nível da linha de base em uma análise de 35 min. O método foi validado segundo as diretrizes da legislação nacional vigente de forma a demonstrar sua seletividade, linearidade, precisão, exatidão e robustez. O potencial do método como indicativo de estabilidade também foi avaliado por meio de estudo de degradação forçada, com resultados satisfatórios. Assim, com a combinação dos métodos por HPLCDAD e TLC, é possível obter informações suficientes para a caracterização adequada do perfil de constituintes da amostra. A aplicação de desenhos experimentais durante o desenvolvimento dos métodos supracitados também permitiu um melhor entendimento do comportamento cromatográfico dos analitos em função das variáveis experimentais, o que pode facilitar o processo de adaptações futuras desses métodos para atender às necessidades específicas de laboratórios distintos. Como produto deste estudo, foi elaborada uma proposta de monografia referente às inflorescências de C. sativa, apresentada em anexo, a ser submetida à avaliação da Agência Nacional de Vigilância Sanitária (ANVISA) para inclusão na Farmacopeia Brasileira.