Caracterização molecular e funcional do gene AT1G52200 (AtPLAC8-11.1) de Arabidopsis thaliana - Valandro, Fernanda (2018)
A morte celular programada (do inglês, Programmed Cell Death) é um processo geneticamente controlado que provoca o suicídio celular em organismos eucarióticos e procarióticos. A PCD ocorre em plantas durante seu desenvolvimento e quando expostas a diferentes condições de estresses caracterizados por estresses abióticos e bióticos. Diversos estudos foram realizados para entender os mecanismos relacionados à PCD em plantas, utilizando principalmente Arabidopsis thaliana. Recentemente, uma rede chamada "deathosome LSD1" foi sugerida em Arabidopsis e mostra as interações entre os reguladores de morte celular conhecidos, como o LSD1 (Lesion Simulating Disease 1), um gene central nessa rede, e seus parceiros de interação. O gene At1g52200 que codifica uma proteína do motivo PLAC8 (placent specific 8) foi descrito como componente dessa rede, mas sua função não foi estudada até o momento. O objetivo geral deste trabalho é estudar AtPLAC8-11.1 e verificar a existência do transcrito alternativo AtPLAC8-11.2 previsto in silico. Para isso, os insertos amplificados a partir de cDNA de A. thaliana, AtPLAC8-11.1 e AtPLAC8-11.2 foram clonados no vector de entrada pENTR/D-TOPO, e o AtPLAC8-11.1 foi subclonado em vetores binários de destino. Plantas transgênicas de Arabidopsis superexpressando AtPLAC8-11.1 foram geradas via floral dipping. Além disso, via banco de sementes Arabidopsis Stock Center (ABRC), linhagens mutantes knockdown e knockout para AtPLAC8-11.1, com inserção de T-DNA no promotor e primeiro éxon do gene, respectivamente foram adquiridas e genotipadas. As plantas knockout plac8-11.1 apresentaram maior comprimento de raiz, quando comparado ao tipo selvagem, indicando um possível papel deste gene no desenvolvimento radicular. Nossos resultados mostraram a existência de AtPLAC8-11.2, no entanto, o nível de transcritos é baixo na parte aérea de Arabidopsis, quando comparado ao AtPLAC8-11.1. Estudos preliminares indicam a localização subcelular de AtPLAC8-11.1 na membrana plasmática e eventual reciclagem por vesículas secretoras. Dificuldades na fase de seleção de plantas de Arabidopsis transformadas contendo a construção para super-expressão de AtPLAC8-11.1 indicam a possibilidade de que altos níveis transcricionais de AtPLAC8-11.1 possam ser prejudiciais à planta, especialmente em condições de estresse. Estes resultados indicam o envolvimento de AtPLAC8-11.1 no processo de PCD em Arabidopsis.