Produção de saponinas triterpênicas bioativas em cultivos celulares de Quillaja brasiliensis - Magedans, Yve Verônica da Silva (2022)
Quillaja brasiliensis é uma espécie arbórea conhecida popularmente como pau-sabão, que produz saponinas triterpênicas em suas folhas. As saponinas de Q. brasiliensis apresentam pronunciada atividade adjuvante em vacinas veterinárias experimentais, de forma comparável ao produto comercial Quil-A®, obtido de cascas de Quillaja saponaria. Adjuvantes são adicionados às vacinas inativadas para aumentar a potência e duração da resposta imune, garantindo a segurança e eficiência dessas formulações. Tendo em vista a possibilidade da utilização de Q. brasiliensis para a obtenção de saponinas com potencial uso comercial e considerando a necessidade de maior conhecimento sobre a produção e acúmulo sustentável de metabólitos ativos em geral, esta tese visou definir procedimentos para estabelecer culturas celulares de Q. brasiliensis e avaliar sua competência e viabilidade para produção de saponinas. Extensa análise da literatura de metabolismo especializado de plantas resultou em dois artigos de revisão, um voltado a saponinas imunoadjuvantes de Quillaja sp. e outro, à biotecnologia e biossíntese de saponinas triterpênicas. Cultivos celulares foram estabelecidos, sendo que o ciclo de cultivo de suspensões celulares foi definido como sendo de 21 dias. A produção de saponinas acompanhou o acúmulo da massa seca celular, e conteúdo máximo de saponinas coincide com o final da fase exponencial de crescimento. A caracterização química inicial das saponinas produzidas por suspensões celulares foi obtida. Sete compostos foram tentativamente identificados por LC-MS, e os padrões de fragmentação indicam que ácido quiláico foi a principal aglicona presente. As saponinas purificadas de suspensões celulares foram testadas em um ensaio com vacinas adjuvantadas contra o vírus da gripe. Houve um aumento de anticorpos em indivíduos vacinados com vacinas adjuvantadas com extratos celulares, principalmente IgG total e IgG2, contudo em um nível menor que as formulações adjuvantadas com compostos purificados de folhas de Q. brasiliensis. Além disso, protocolos de quantificação de saponinas e esteróis por GC-MS foram desenvolvidos. Estes protocolos irão subsidiar estudos de fluxo metabólico e avaliação do investimento de carbono nos pools desses compostos em suspensões celulares. Em suma, cultivos celulares de Q. brasiliensis constituem uma fonte de saponinas bioativas e representam uma excelente plataforma para o estudo da biossíntese destes produtos naturais.