Estudo de queratinase de bacillus subtilis como agente depilatório e romotor de absorção para uso tópico em humanos - Krucinski, Viviane Cristina (2012)
O presente trabalho iniciou com a caracterização de 19 bactérias isoladas em meio seletivo contendo farinha de pena seguido da seleção de seis cepas com elevada atividade queratinolítica. Os seis microrganismos selecionados foram denominados de NP4, NP5, NP8, FCA1, FCA3 e FCA8. Os mesmos foram cultivados em diferentes meios de cultivo: fios de cabelo humano (CB), farinha de pena (FP) e Luria-Bertani e seus sobrenadantes foram ensaiados frente aos substratos azoqueratina e azul de queratina. Desse rastreamento, o isolado NP5, Bacillus subtilis, foi o que teve maior atividade queratinolítica e foi o escolhido para o prosseguimento do estudo. A Influência de parâmetros nutricionais e físico-químicos na produção enzimática foi avaliada e as condições finais de cultivo foram: inoculo de 10[sobrescrito 8] células de NP5 em meio com 7,5% de farinha de pena e 0,05% de extrato de levedura em água deionizada, em 72 horas, a 37 ◦C e 180 rpm. Nessas condições de cultivo obtivemos uma atividade de 4,91 ± 0,30 U.h.min-1. A seguir, a atividade queratinolítica do sobrenadante foi avaliada antes e após incorporação em quatro veículos de uso dermatológico: Gelcreme Sepigel®, Gel Aristoflex® AVC, Gel Carbopol® e Gel Goma xantana®. Com base nas atividades obtidas, o veículo dermatológico escolhido foi o gelcreme sepigel e o mesmo foi utilizado para os testes in vitro, em Célula de Franz Modificada, e in vivo, em camundongos. Nos experimentos em Célula de Franz Modificada, a formulação enzimática mostrou ser capaz de promover maior penetração de diclofenaco sódico no estrato córneo nos tempos de 15 minutos e 1 hora após o tratamento. No experimento in vivo, 4 grupos de animais foram ensaiados: enzima, papaína, veículo e controle. Os grupos tratados com enzima e papaína apresentam áreas pilosas falhadas em comparação aos grupos veículo e controle e, na formulação gelcreme, o extrato enzimático se mostrou mais eficiente no efeito depilatório do que a papaína. Ainda dentro desse experimento aguardamos os resultados das análises histológicas do pulmão, baço, coração, fígado, cérebro, rins e da pele para a avaliação final.