Capacidade de formação de biofilmes por cepas de Salmonella enterica subsp. enterica provenientes de fábrica de ração suína e ação de óleos essencias sobre biofilmes - Laviniki, Vanessa (2018)
A ração animal tem sido considerada como um importante veículo para introdução de Salmonella enterica subsp. enterica em granjas de suínos. Em fábricas de ração, a principal fonte de contaminação por Salmonella é a entrada de ingredientes contaminados ou a persistência de cepas no ambiente de processamento. Além disso, Salmonella possui a habilidade de formar biofilme em diversas superfícies abióticas, o que pode contribuir para sua persistência nesses ambientes. Neste sentido, os objetivos deste estudo foram: i. determinar fenotipicamente a formação de biofilme em cepas de Salmonella enterica subsp. enterica provenientes de fábrica de ração suína; ii. confirmar a presença dos principais genes associados aos fenótipos de formação de biofilme; iii. avaliar o efeito do óleo essencial de orégano (Oreganum vulgare), óleo essencial de tomilho (Thymus vulgaris) e seus compostos majoritários carvacrol e timol, na inibição da formação de biofilme e iv. avaliar o efeito de óleo essencial de orégano (Oreganum vulgare), óleo essencial de tomilho (Thymus vulgaris), seus compostos majoritários carvacrol e timol e ácidos orgânicos (acético e lático) na remoção de biofilme maduros de Salmonella enterica subsp. enterica. Sendo assim, 54 cepas de Salmonella enterica subsp. enterica isoladas a partir de quatro fábricas de ração, pertencentes a diferentes sorovares, foram avaliadas quanto a sua capacidade de formação de biofilme através de ensaios fenotípicos de morfologia celular, formação de película na interface ar-líquido e formação de biofilme em microplacas de poliestireno. Além disso, pesquisou-se a presença de genes responsáveis pela formação de biofilme e avaliou-se os efeitos antibacteriano e antibiofilme de diferentes agentes antimicrobianos através de ensaios em microplacas de poliestireno, contagem de UFC em cupons de flandres e microscopia confocal. Todas as cepas apresentaram morfotipo rdar a 28° e morfotipo saw a 37°C. Destas 81,48 % (44/54) pertenceram aos perfis fenotípicos 1, 3 e 4, os quais são moderadamente formadores de biofilme a 28°C, não formam biofilme a 37°C e diferem quanto a produção de película na interface ar-líquido. Enquanto que 14,81 % (9/54) pertenceram aos perfis 2, 5, 6, 7 e 8. Os genes pesquisados (csgD, fimA, adrA e bapA) foram encontrados em todas as cepas. Após os ensaios fenotípicos para formação de biofilme, quatro cepas pertencentes ao sorovar Montevideo e que demostraram possuir fenótipo para formação de biofilme in vitro foram usadas para estudar o efeito antimicrobiano e antibiofilme de diferentes agentes antimicrobianos. O óleo essencial de orégano, óleo essencial de tomilho e o composto majoritário timol foram capazes de inibir o crescimento de células planctônicas de todas cepas estudadas com CIM de 0,05 %, enquanto que o composto majoritário carvacrol foi capaz de inibir o crescimento com CIM de 0,025 %. Contudo, em concentrações sub-inibitórias (CIM/2) estes agentes foram capazes de reduzir a quantidade de biofilme formado por todas cepas de Salmonella, exceto a formação de biofilme por Salmonella Typhimurium ATCC 14028 na presença de óleo de tomilho. Somente os óleos essenciais de orégano e tomilho em concentrações de 0,1 % foram capazes de reduzir a biomassa de biofilmes maduros nos ensaios em microplacas de poliestireno. Enquanto que, os óleos essenciais e compostos majoritários em concentrações de 0,1 % e ácidos orgânicos em concentrações de 2,5 % foram capazes de reduzir a biomassa de biofilmes maduros de 1 até 3 log UFC/cupom em ambas cepas testadas nos ensaios em cupons de flandres. Nas imagens de microscopia confocal, os efeitos de redução de biomassa de biofilmes maduros tratados com os óleos essenciais, compostos majoritários e ácidos orgânicos também foram observados. De acordo com os resultados encontrados, foi possível confirmar que as cepas de Salmonella enterica subsp. enterica isoladas de fábrica de ração possuem características fenotípicas para formar biofilme in vitro. Além disso, os óleos essenciais, compostos majoritários e ácidos orgânicos podem ser alternativas úteis como coadjuvantes nos programas de controle de Salmonella em ambientes de fábrica de ração para suínos.