Análise de alterações de sequência nos genes associados à Doença de Niemann-Pick tipo C e avaliação de genes candidatos a modificadores de fenótipo - Bonatto, Márcia Polese (2019)
A doença de Niemann-Pick tipo C (NP-C) é uma doença autossômica recessiva causada por mutações nos genes NPC1 ou NPC2 e se caracteriza principalmente pelo acúmulo do colesterol não esterificado no lisossomo/endossomo tardio. Aproximadamente 95% dos pacientes apresentam mutação no gene NPC1 enquanto 5% em NPC2. O gene NPC1 codifica uma glicoproteína transmembrânica de 1278 aminoácidos, com 13 domínios que reside na membrana do lisossomo/endossomo tardio. O produto do gene NPC2 é uma glicoproteína de 132 aminoácidos expressa em todos os tecidos, sendo uma proteína solúvel que se liga ao colesterol. A incidência de NP-C é estimada em 0,95 casos para cada 100.000 nascidos vivos. O objetivo geral deste trabalho foi identificar o genótipo de pacientes com NP-C, determinando a frequência de mutações comuns e caracterizando mutações novas nos genes associados à doença, e analisar variantes de sequência em genes candidatos a modificadores de fenótipo dessa doença. As mutações mais frequentemente encontradas foram p.Ala1035Val (27,3%), p.Pro1007Ala (17,0%) e p.Phe1221Serfs*20 (14,8%). Na identificação das variantes de sequência, foram identificadas 5 novas variantes potencialmente patogênicas, sendo 1 deleção pequena (p.Lys38_Tyr40del), 1 mutação do (p.Asn195Lysfs*2) e 3 mutações de ponto (p.Cys238Arg, p.Ser365Pro e p.Val694Met). Um outro subgrupo de amostras (n=34), proveniente de indivíduos com um único alelo mutante, foram submetidos a uma análise molecular mais abrangente visando a identificação de possíveis rearranjos gênicos. Os resultados obtidos confirmam os relatos que indicam uma frequência muito baixa de rearranjos gênicos associados à NP-C, pois não foi identificado nenhum paciente com perfil anormal através desse protocolo abrangente. Considerando que chaperonas diferentes foram associadas à expressão do gene NPC1, polimorfismos de nucleotídeos únicos (SNPs) nos genes que codificam a chaperona DNAJB6 e a cochaperona CHIP, ambas proteínas do sistema de controle de qualidade proteica, foram selecionados e analisados para investigar uma possível associação com variações fenotípicas de pacientes com NP-C. Essa avaliação permitiu estabelecer as frequências alélicas e genotípicas dos SNPs rs9647660, rs12668448, rs4716707 e rs6459770 (no gene DNAJB6) e o rs6597 (no gene CHIP) nos pacientes e em amostras de indivíduos normais. Os resultados obtidos permitiram comparar os grupos (pacientes e controles) e, dentro do grupo de pacientes, comparar os diferentes fenótipos, mas não foram encontradas diferenças estatisticamente significativas. Além disso, foi avaliado o gene que codifica a apolipoproteína E (ApoE), uma lipoproteína envolvida no metabolismo do colesterol, que se caracteriza por apresentar 3 alelos distintos a partir de dois polimorfismos específicos (rs429358 e rs7412) no gene ApoE. As frequências alélicas de ApoE ε2, ApoE ε3 e ApoE ε4 no grupo de pacientes foi estabelecida em 6,3%, 82,9% e 10,8%, respectivamente. O genótipo mais frequente foi o ApoE ε3/ε3 (63,8%). Apesar de não terem sido encontradas diferenças estatisticamente significativas, não podemos descartar completamente o efeito da ApoE no fenótipo dos pacientes, considerando que esta proteína está presente no metabolismo do colesterol. Por fim, os dados produzidos através desse trabalho contribuem para o melhor conhecimento das bases moleculares da NP-C.