Estudo do floroglucinol uliginosina B : ação sobre o sistema purinérgico, toxicidade e predição das propriedades ADMET/drug-likeness in silico - Silva, Camila Pires Machado da (2022)
A uliginosina B (ULI) é um acil-fluroglucinol dimérico presente em espécies de Hypericum nativas da América do Sul. Para esse trabalho, foi obtido de H. polyanthemum. Estudos anteriores relataram que ULI possui efeitos do tipo antidepressivo e antinociceptivo em roedores, efeitos estes que parecem pelo menos em parte estar relacionados à sua capacidade de inibir a recaptação neuronal de monoaminas, especialmente de dopamina, e de aumentar a disponibilidade de adenosina cerebral. Esse floroglucinol tem sido considerado uma molécula promissora para o desenvolvimento de farmacos neuroativos. Contudo, o seu perfil farmacocinético não foi estabelecido e os estudos de toxicidade, embora indiquem segurança para neurônios sadios, são ainda limitados em número e natureza. Com isso, os objetivos dessa tese foram: aprofundar o estudo da interação da ULI com o sistema purinergico e dopaminérgico; avaliar sua toxicidade em linhagem celular de hepatocarcinoma HepG2 e no modelo Caenorhabditis elegans; e realizar uma predição in silico das suas propriedades ADMET/drug-likeness. A ULI diminuiu a hidrólise de ATP (CI50 127 μM) e ADP (70% apenas com ULI 100 μM) , mas não afetou a hidrólise de AMP, em sinaptossomos estriatais de ratos. A análise in silico, através do programa GOLD, indicou interação com resíduos de aminoácidos nos sítios ativos da enzima ecto-5’-nucleotidase, porém sem interação com os sítios do zinco. O estudo in vitro com enzima ecto-5’-nucleotidase humana isolada demonstrou que a ULI (1 – 1000 μM) não altera a atividade da enzima. Tomados em conjunto, esses resultados mostram que ULI não altera a atividade da enzima ecto-5’-nucleotidase, mas provoca alterações na cascata do sistema purinérgico, possivelmente através da inibição da atividade das enzimas NTPDases, com o acúmulo de ATP extracelular, o que pode contribuir para o efeito do tipo antidepressivo demonstrado em estudos anteriores. No modelo C. elegans, ULI apresentou toxicidade aguda (CI50 14 μM) na cepa selvagem (N2). Mas não afetou a reprodução, nem o desenvolvimento corporal dos nematódeos, o que indica uma resposta adaptativa aos efeitos tóxicos agudos da ULI. Na cepa knouckout para glicoproteina-P (NL131) não afetou a sobrevivência dos nematódeos, indicando que seu mecanismo de toxicidade pode ser dependente da entrada via glicoproteina-P. Os dados obtidos na cepa BY 200 (neurônios dopaminérgicos marcados com GFP) demonstraram ação dopaminérgica e sugerem que em alta concentração (20 μM) a ULI induz uma neurodegeneração leve e internalização do transportador neuronal de dopamina (DAT-1). A ULI apresentou efeito citotóxico na linhagem celular HepG2 (CI50 de 3,5 μM, 6,5 μM e 7,5 μM, com 24, 48 e 72 horas de incubação, respectivamente), sugerindo hepatotoxicidade. Os dados das propriedades ADMET/drug-likeness, preditas pelos programas ACD/Percepta, SwissADME e pkCSM-pharmacokinetics, indicam que a ULI apresenta boas propriedades drug-likeness, seguindo a regra dos cinco de Lipinski. Contudo, pode apresentar problemas de absorção passiva pelo trato grastrointestinal e baixa penetração no SNC. Foi predita também como substrato para glicoproteína-P e CYP3A4. Em conclusão, os resultados obtidos nesta tese reforçam a hipótese de interação da uliginosina B com o sistema purinérgico e dopaminérgico, sugerem toxicidade hepática e envolvimento de transportadores para a passagem da ULI através das membranas biológicas. Assim, considerando a fase em que esse trabalho se encontra dentro do desenvolvimento de fármacos, os dados apontam para a continuidade dos estudos com a uliginosina B, tendo como perspectivas imediatas estudos do perfil farmacocinético in vivo e de toxicidade em mamíferos.