Papel e regulação da via de processamento de pequenos RNAs em células somáticas do nematoide Caenorhabditis elegans

• Ano de defesa: 2016
• Autor(a) principal: Souza, Evandro Araujo de [UNIFESP]
• Orientador(a): Mori, Marcelo Alves da Silva [UNIFESP]
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• dARK ID: ark:/48912/001300002rx8d
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
• Palavras-chave em Português: Envelhecimento; Caenorhabdifis elegans; Linhagem germinativa dicer; Rnai
• Palavras-chave em Inglês: Aging; Caenorhabdifis elegans; Line; Germ dicer; Rnai
• Link de acesso: https://sucupira.capes.gov.br/sucupira/public/consultas/coleta/trabalhoConclusao/viewTrabalhoConclusao.jsf?popup=true&id_trabalho=3686551; http://repositorio.unifesp.br/handle/11600/46185

o envelhecimento aumenta o risco de doenças crônicas, podendo ser retardado pela restrição calórica. Anteriormente, nosso grupo e colaboradores identificaram que, de forma conservada, a síntese de microRNAs diminui com o envelhecimento - sendo revertida pela restrição calórica. Esse fenômeno é decorrente da regulação da expressão de enzimas chave no processamento de microRNAs, principalmente de Dicer, que cliva o pre-miRNA em microRNA maduro. Buscamos nesse trabalho identificar como componentes dessa via são reguladas em C. elegans em situações que afetam a longevidade. Para isso, utilizamos linhagens integradas ao genoma do C. elegans em que o gene de Dicer ou Argonauta-I , sob controle de seus respectivos promotores codificam uma proteína fusionada à GFP. Com a análise microscópica, monitoramos a expressão dessas proteínas em diferentes situações, como restrição calórica, envelhecimento e vermes longevos sem linhagem germinativa. Identificamos que na ausência da linhagem gerrninati va há ativação 'da via de síntese de microRNAs cm células somáticas. Além disso, o aumento na longevidade desses vermes depende de Dicer. Para identificar reguladores de expressão de Dicer e Argonauta-l , realizamos uma varredura genética a partir de análise do modENCODE (banco de dados de experimentos de ChIP-Seq). Para Argonauta-L, conseguimos identificar que há regulação por um fator de transcrição conservado, PE-:li\-4/foxA, que atua na restrição calórica. Por fim, obtivemos um conjunto de resultados que são uma nota de cautela do uso irrestrito do vetor controle de RNAi L4440 para o estudo de transgenes em vermes, onde este produz um RNA dupla-fita que silencia in vivo o transgene GFP