Papel e regulação da via de processamento de pequenos RNAs em células somáticas do nematoide Caenorhabditis elegans - Souza, Evandro Araujo de [UNIFESP] (2016)
o envelhecimento aumenta o risco de doenças crônicas, podendo ser retardado pela restrição calórica. Anteriormente, nosso grupo e colaboradores identificaram que, de forma conservada, a síntese de microRNAs diminui com o envelhecimento - sendo revertida pela restrição calórica. Esse fenômeno é decorrente da regulação da expressão de enzimas chave no processamento de microRNAs, principalmente de Dicer, que cliva o pre-miRNA em microRNA maduro. Buscamos nesse trabalho identificar como componentes dessa via são reguladas em C. elegans em situações que afetam a longevidade. Para isso, utilizamos linhagens integradas ao genoma do C. elegans em que o gene de Dicer ou Argonauta-I , sob controle de seus respectivos promotores codificam uma proteína fusionada à GFP. Com a análise microscópica, monitoramos a expressão dessas proteínas em diferentes situações, como restrição calórica, envelhecimento e vermes longevos sem linhagem germinativa. Identificamos que na ausência da linhagem gerrninati va há ativação 'da via de síntese de microRNAs cm células somáticas. Além disso, o aumento na longevidade desses vermes depende de Dicer. Para identificar reguladores de expressão de Dicer e Argonauta-l , realizamos uma varredura genética a partir de análise do modENCODE (banco de dados de experimentos de ChIP-Seq). Para Argonauta-L, conseguimos identificar que há regulação por um fator de transcrição conservado, PE-:li\-4/foxA, que atua na restrição calórica. Por fim, obtivemos um conjunto de resultados que são uma nota de cautela do uso irrestrito do vetor controle de RNAi L4440 para o estudo de transgenes em vermes, onde este produz um RNA dupla-fita que silencia in vivo o transgene GFP