Regulação da maquinaria de reparo do DNA em paracoccidioides brasiliensis durante o estresse oxidativo. - Chaves, Alison Felipe Alencar [UNIFESP] (2019)
A paracoccidioidomicose é uma doença granulomatosa causada por fungos do gênero Paracoccidioides e de ampla distribuição na América Latina. A doença tem elevado potencial incapacitante e, no entanto, ainda é absolutamente negligenciada. Estes fungos sofrem diferenciação celular induzida por mudanças na temperatura e este evento é fundamental para a capacidade de causar doença. O conhecimento de que padrões moleculares do fungo podem ser verdadeiros fatores de virulência ainda é limitado pelas dificuldades inerentes à manipulação genética destes fungos. Os estudos que têm tentado compreender estes aspectos moleculares dependem do método de transformação mediada por Agrobacterium tumefaciens, um modelo altamente dispendioso em termos de tempo e recursos, além de possuir baixa reprodutibilidade. Para superar estas barreiras é preciso compreender melhor os mecanismos de reparo do DNA usados pelo fungo. Isto porque o estabelecimento de uma linhagem knockout depende da ocorrência de eventos de recombinação homóloga. O presente estudo mostrou que P. brasiliensis possui uma maquinaria conservada de reparo para responder a quebras na dupla fita do DNA e que esta maquinaria também é responsiva ao estresse oxidativo. Estas vias de reparo de quebras na dupla fita se comunicam com as vias de Ras GTPase e Hog1 Map quinase. Além disso, observou-se que a inibição da via de reparo mediada pela junção de extremidades não homólogas (JENH) fornece uma resposta protetora para leveduras de P. brasiliensis durante uma condição de estresse oxidativo normalmente letal para o fungo. Possivelmente, este evento tem relação com a maior eficiência do reparo via recombinação homóloga induzida pela inibição da JENH. Finalmente, observou-se que a combinação da inibição da via de JENH, por meio da inibição de Dnl4 ou GSK3, aliada ao estresse oxidativo induzido pode elevar a eficiência de processos de transformação em leveduras de P. brasiliensis. Em conjunto, estes achados ampliam o repertório de possibilidades para conseguir o estabelecimento de uma linhagem knockout em P. brasiliensis.