Envolvimento da sinalização Notch e de metaloproteases em co-culturas de células endoteliais e células leucêmicas

• Ano de defesa: 2021
• Autor(a) principal: Souza, Emanoelle Fabossi de [UNIFESP]
• Orientador(a): Justo, Giselle Zenker [UNIFESP]
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• dARK ID: ark:/48912/001300001zk5g
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal de São Paulo
• Palavras-chave em Português: Leucemia; Angiogênese; Notch; Metaloprotease; Câncer
• Link de acesso: https://repositorio.unifesp.br/handle/11600/62043

A leucemia mieloide crônica (LMC) é uma doença mieloproliferativa, caracterizada pela translocação BCR-ABL, que gera uma tirosina quinase constitutivamente ativa, a qual estimula a proliferação e sobrevivência das células de LMC. A resistência à quimioterapia é um dos principais aspectos da falha dos tratamentos no câncer, estando relacionada frequentemente à superexpressão dos transportadores ABCB1, incluindo a glicoproteína P (Pgp). Além disso, interações entre as células leucêmicas e as células endoteliais vizinhas no microambiente da medula óssea são importantes para o desenvolvimento da doença e suscetibilidade à quimioterapia. Estudos sugerem uma associação entre a via Notch e o fenótipo MDR. Em adição, a via Notch estaria envolvida no estímulo da função de células endoteliais em co-culturas com células leucêmicas e este processo envolve a ativação de metaloproteases (MMP-2 e MMP-9). Portanto, neste trabalho investigou-se diferenças na sinalização Notch e na expressão/atividade de metaloproteases devido ao fenótipo de resistência a múltiplas drogas (MDR) em sistemas de co-cultura entre células de LMC (linhagens K562 e sua variante superexpressando Pgp, Lucena 1) e células endoteliais (linhagem ECV-304). Os resultados mostraram que as células Lucena 1 apresentam níveis superiores de Notch1 e 2, bem como do domínio interacelular ativo de Notch1 (NICD1), em relação à K562. Uma alta expressão de Hes1 foi observada em ambas linhages, sugerindo ativação de Notch nas células MDR+. As culturas de células de LMC com meio condicionado das células endoteliais levaram a um aumento na expressão de NICD1 e Hes1 nas células Lucena 1, sugerindo ativação desta via também nestas condições. Por outro lado, houve redução significativa de Notch2 e c-Myc em ambas linhagens. A interação célula-célula de maneira contato-dependente estimulou a maior expressão de Notch 2 e de c-Myc nas células com fenótipo MDR, enquanto que uma redução significativa de Notch1 nas células Lucena 1 e de NICD1 em ambas células foi observado. O meio condicionado das células de LMC reduziu a expressão de Notch1 e NICD1 nas células endoteliais e os efeitos sobre c-Myc e Hes1 corroboraram esses achados. Não se observou diferença na atividade gelatinolítica de MMP-2 e MMP-9 entre as linhagens de LMC. Os efeitos da co-cultura sobre as gelatinases foram mais proeminentes nas células K562, aumentando a expressão de MMP-9 na presença do meio condicionado das células endoteliais e de MMP-2 na co-cultura em contato direto. A comunicação célula-célula, por meio de mediadores solúveis e também contato físico, levou ao estímulo da atividade de MMPs nos sobrenadantes das culturas em todas as condições experimentais. Em conjunto os resultados sugerem uma associação entre o fenótipo MDR e a sinalização Notch nas células de LMC, que pode ser influenciada pelo cross-talk entre as células leucêmicas e as células endoteliais, sendo acompanhada da modulação de MMP-2 e MMP-9.