Enzimas lisossomais em células renais em cultura submetidas a condições que mimetizam o estado diabético - Peres, Giovani Bravin [UNIFESP] (2016)
A nefropatia diabética afeta cerca de um terço de todos os pacientes diabéticos e é a principal causa de estágio final de doença renal. Com o uso de microscopia intravital e albumina fluorescente, demonstrou-se que a filtração renal de albumina em ratos normais é cerca de 50 vezes os valores previamente reportados, obtidos por micropunção. Como a concentração de albumina na urina normal é muito baixa, aparentemente há uma via de recuperação, possivelmente envolvendo células tubulares -proximais, A albumina internalizada pode tanto ser devolvida de volta para a circulação, via transcitose, ou seguir a degradação lisossomal, com fragmentos exocitados de volta para o lúmen tubular e excretados para a urina. Logo, o aumento da albuminuria em pacientes diabéticos pode ser devido às baixas taxas de degradação da albumina. Recentemente, nós reportamos uma queda na expressão e na atividade.de proteases lisossomais, especialmente catepsina B e L, no rim de ratos diabéticos durante os estágios iniciais da doença (10 e 30 dias). Alterações morfológicas importantes foram observadas nos túbulos proximais, que perderam sua borda em escova e apresentaram paredes mais delgadas, em comparação com ratos normais. Catepsina B foi localizada por imunohistoquímica principalmente nas células tubulares proximais, sugerindo que essas células estão envolvidas com o estágio inicial da doença. Apesar de toda essa informação acerca das enzimas lisossomais e diabetes, os. mecanismos que levam a essas mudanças são desconhecidos. O objetivo do presente estudo foi investigar os efeitos da alta glicose e de produtos de glicação avançada (AGEs) sobre as enzimas lisossomais de células renais. Linhagens imortalizadàs derivadas de células renais foram submetidas a condições que mimetizam o estado diabético - alta glicose e/ou albuniina-AGE (BSA-AGE) - e seus efeitos sobre a proliferação celular, expressão e atividade de enzimas lisossomais, bem como a expressão de mediadores da inflamação e do metabolismo celular foram estudados. Os resultados revelaram que a alta glicose aumentou a taxa de proliferação apenas das células mesangiais (CMHI), enquanto as células epiteliais não foram afetadas. Ainda que controle-BSA não possuiu efeito sobre a velocidade de proliferação das células, BSA-AGE causou uma queda acentuada (dose dependente) no número de todas as células, independentemente da concentração de glicose no meio de cultura. Em relação às enzimas lisossomais, a principal cisteíno-protease foi catepsina B, embora a concentração tenha sido muito menor nas células mesangiais do que nas epiteliais. A exposição a alta glicose não apresentou efeito sobre a atividade da enzima, mas BSA-AGE causou uma acentuada queda apenas em LLCPK, enquanto um aumento foi observado nas outras linhagens. Além disso, os níveis de óxido nítrico (NO) produzido e secretado no meio de cultura estavam aumentados em todas as células expostas a BSA-AGE, sugerindo estresse oxidativo. Com relação a expressão de algumas proteínas, experimentos de Western blottíng revelaram que entre os alvos investigados, mTOR (mammalian target of rapamycin) foi o mais significativamnete afetado pela exposição com BSA-AGE