Caracterização temporal da expressão dos genes das famílias FOS e JUN após estímulo mitogênico em fibroblastos e células-tronco neurais de ratos - Mosini, Amanda Cristina [UNIFESP] (2018)
Introdução: Durante o processo de desenvolvimento e no processo de aprendizagem os neurônios sofrem uma estimulação intensa, desencadeando o aparecimento e ativação de genes de resposta imediata, como o c-Fos. Os genes das famílias FOS e JUN são protooncogene que participam de importantes processos celulares, como mitose e crescimento celular, processos bioquímicos, como plasticidade neuronal, além de serem utilizadas como biomarcadores moleculares que auxiliam no estudo de aspectos fisiológicos. Objetivo: Sabendo da importância dos genes de resposta imediata o objetivo geral deste trabalho foi comparar o perfil temporal da expressão gênica genes das famílias FOS e JUN em culturas celulares de fibroblastos da derme e de células-tronco neurais e da SVZ, hipocampo e do cerebelo de ratos adultos e neonatos após estímulo mitogênico. Material e Métodos: Foram utilizados 90 ratos (Wistar) neonatos de 6 dias e 130 ratos (Wistar) adultos de 8 semanas. Dos animais neonatos foram extraídos fibroblastos da região da derme abdominal e células-tronco neurais do cerebelo, enquanto dos adultos, foram extraídos fibroblastos da mesma região e célulastronco do hipocampo e da SVZ. Após o estabelecimento das culturas e do tempo de proliferação pré-estabelecidos, as culturas foram submetidas ao estímulo mitogênico, com o fator de crescimento FGF-2. O mapeamento do padrão de expressão dos genes das famílias Fos e Jun foram: Grupo controle (sem estímulo), 0,5h; 1h; 3h e 6h após o estímulo com FGF-2. Após diferentes tempos após a estimulação mitogênica, foi feita a extração de mRNA para a análise dos genes Fos e Jun por meio de PCR em tempo real. Resultados: Em animais neonatos, o padrão de expressão gênico foi similar em fibroblasto e células-tronco do cerebelo, a expressão em condição basal mostrou-se baixa, apresentando um pico de expressão 0,5h após o estímulo com o FGF-2 retornando ao seu valor basal entre 1h – 3h após a estimulação. Em animais adultos, com exceção dos genes Fra1 e JunD (em fibroblastos, hipocampo e SVZ) não houve a expressão dos genes após a estimulação com o FGF-2. Em fibroblastos e hipocampo, o gene Fra1 apresentou seu pico de expressão 0,5h após a estimulação, enquanto na SVZ o pico de expressão mostrou-se 6h após a estimulação. Em relação ao gene JunD, nos fibroblastos a expressão apresentou um pico 0,5h após estimulação, retornando aos valores basais 1h após o estímulo e apresentando um segundo pico de expressão 6h após estimulação, nas outras regiões a expressão do gene mostrou-se baixa e sem alterações significantes. Conclusão: Os padrões distintos na expressão do mRNA em ratos neonatos e adultos demonstram a diferença significativa na neurogênese de indivíduos da mesma espécie, porém de diferentes estágios do desenvolvimento, podendo evidenciar alterações relevantes, que desencadeiam possíveis alterações a níveis celulares (alterações no ciclo celular) e moleculares (controle da expressão de outros genes), podendo resultar até em alterações comportamentais (memória) e cognitivas (plasticidade neural).