Manchas de ejaculado pré e pós-vasectomia: pureza e quantidade de DNA recuperado após 10 anos de armazenamento - Mautoni, Carolina [UNIFESP] (2017)
A ausência de espermatozóides no material colhido das vítimas de estupro pode ser devido a vários fatores, incluindo o fato de que o agressor pode ter azoospermia, condição obtida, por exemplo, como resultado de uma vasectomia bem sucedida. Há ainda situações em que o único material disponível para análise é derivado de vestígios, como manchas de sêmen na roupa da vítima. Os objetivos deste estudo foram: avaliar a possibilidade de obter perfil de STR autossômico e STR-Y em manchas de líquido seminal, armazenados por 10 anos e estabelecer metodologia adequada para casos de vestígios provenientes de agressão sexual, pendentes para análise e inclusão em bancos de dados (BNPG). Material e Métodos: Foram utilizadas amostras biológicas de líquido seminal pré e pósvasectomia, provenientes de 33 indivíduos vasectomizados, preservadas em forma de manchas em tecido de algodão, sendo as mesmas armazenadas adequadamente, em caixas de papelão. Neste estudo, o DNA do material foi extraído pelo QIAmp micro Kit (QIAGEN) e quantificado pela técnica da PCR Real Time, utilizando-se o Quantifiler® Duo DNA Kit seguindo-se as instruções do fabricante. A amplificação foi feita através dos sistemas PowerPlex® ESI 17 Pro System, PowerPlex® 23-Y e PowerPlex® FUSION, analisadas no sequenciador ABI 3500 utilizando o programa Gene MapperTM IDX versão 1.2. Concluímos que é possível obter perfil STR autossômico e STR-Y extraídas de manchas de ejaculado preservadas em tecido de algodão, por longos períodos. O algodão incolor foi uma vantagem no estudo pois facilitou a extração no sentido de não oferecer inibidores de PCR. Ainda sobre essa questão, faz-se necessário enfatizar que mesmo transcorrido grande período de tempo entre a realização das amostras e o atual estudo (10 anos), estas tinham notadamente grau de pureza adequada, e todos os perfis foram obtidos. Os kits comerciais de extração de DNA apresentam reprodutibilidade e aplicabilidade neste tipo de material. Embora em quantidade ínfima de material biológico (mancha contendo 30 uL de líquido seminal de vasectomizados em tecido), a metodologia utilizada na extração de DNA é reprodutível e aplicável nos casos armazenados. Considerando a dificuldade de obtenção de perfil genético em casos de crime sexual, a análise em manchas de tecido deve ser priorizada no universo das amostras acumuladas e estocadas por longos períodos.