Avaliação da heme oxigenase 1 no pré-condicionamento nefrotóxico in vivo e in vitro - Silva, Fernanda Duarte da [UNIFESP] (2018)
A nefrotoxicidade é um dos principais efeitos colaterais dos antibióticos aminoglicosídeos como a Gentamicina (Genta). O précondicionamento (PC) referese à situação em que um órgão ou tecido submetido a uma agressão adquire resistência ou responde menos intensamente quando uma nova agressão é repetida. O mecanismo do PC é bem estudado, acreditase que mecanismos como o aumento da atividade de enzimas antioxidantes como a Hemeoxigenase 1 (HO1) podem estar envolvidos. Objetivo: Estudar a participação da Heme oxigenase 1 (HO1) e o efeito nefroprotetor do PC induzido pela Genta in vivo e in vitro. Métodos in vivo: Ratos Wistar foram divididos nos grupos Controle (CTL), animais tratados com Genta por 10 dias consecutivos (IU), animais tratados com Genta e Hemin por 10 dias consecutivos (IU+HEMIN), animais précondicionados com Genta (ID) e animais précondicionados com Genta e tratados concomitantemente com Hemin (ID+HEMIN). Amostras de sangue e urina foram coletadas pré, pós Tratamento (grupos IU e IU+HEMIN) e pós PC (grupos ID e ID+HEMIN) para análise de creatinina, uréia, fração de excreção de sódio, peróxidos urinários, peroxidação lipídica, proteína carbonilada, Fração antioxidante do plasma, Atividade enzimática (SOD e CAT). Os animais foram eutanaziados e os rins retirados para imunohistoquímica para SOD e CAT. Métodos in vitro: Células de túbulo proximal humana (HK2) foram subdivididas nos grupos controle (CTL), tratadas com Genta por 24h (IU), células tratadas com Genta e com o indutor da HO1 por 24hs (IU+HEMIN), células tratadas com Genta e com o inibidor da HO1 por 24hs concomitantemente (IU+ ZNPP), células précondicionadas com Genta e expostas ao antibiótico após 9 dias (ID), Insulto duplo associado ao indutor da HO1 (ID+HEMIN) e Insulto duplo associado ao inibidor da HO1 (ID+ZNPP). Necrose e apoptose foram avaliados, respectivamente, pelos corantes Acridina Orange/Brometo de Etídeo e Hoescht 33342. A expressão da HO1 foi realizada por Western Blot. Resultados: Ratos tratados com Genta durante 10 dias consecutivos (IU) apresentaram um aumento na creatinina plasmática, uréia, proteinúria, fração de excreção de sódio caracterizando o modelo de LRA Nefrotóxica. O PC (ID) protegeu os animais contra o aumento destes parâmetros. Observamos aumento dos peróxidos urinários, lipídicos e da proteína carbonilada no grupo IU em relação ao grupo CTL e PC (ID). Inversamente, observamos aumento da fração antioxidante do plasma, bem como aumento na imunomarcação para enzimas antioxidantes (superoxido dismutase1 e catalase) no grupo PC em relação aos demais grupos. Interessantemente, o indutor da HO1 (Hemin) potencializou estes efeitos. No principal alvo da Genta, a célula tubular proximal, o PC inibiu a morte celular por necrose e apoptose induzida pelo antibiótico, e o Hemin potencializou o efeito protetor do PC sobre a viabilidade. Conclusão: O PC protegeu os animais da LRA induzida pela Genta e esse efeito foi mediado pela inibição do estresse oxidativo, por uma ação direta na célula tubular proximal e pela indução de enzimas antioxidantes, como a HO1, que pode ser uma alternativa potencial no tratamento da LRA nefrotóxica por aminoglicosídeos.