Identificação e quantificação das isoformas da heparanase em plasma de pacientes com carcinomas gatrointestinais - Origassa, Clarice Silvia Taemi [UNIFESP] (2009)
A heparanase-1 (HPA1) é uma endo-β-glucuronidase que degrada ligações glicosídicas intrassacarídicas entre a hexosamina e ácido glucurônico de cadeias de heparam sulfato, constituintes dos proteoglicanos de matriz extracelular e superfície celular. Seu gene encontra-se localizado no cromossomo 4 humano (4q21,3). A HPA1 gera oligossacarídeos que estão envolvidos na proliferação celular, angiogênese e diferenciação celular relacionados com o desenvolvimento de tumores e metástases. A heparanase-2 (HPA2) é codificada pelo cromossomo 10q23-24. Existem três isoformas da HPA2 de 480, 534 e 592 aminoácidos. As análises dessas proteínas evidenciam que todas essas isoformas são proteínas intracelulares, associadas à membrana, contendo a porção C-terminal voltada para o citoplasma e não apresentam atividade enzimática. O presente estudo tem por objetivo identificar e quantificar a expressão de HPA1 (isoformas 50kDa e 65 kDa), e isoformas da HPA2 no plasma de pacientes com carcinoma gastrointestinal, comparando-se com a expressão em indivíduos não acometidos por neoplasia (grupo controle). As proteínas plasmáticas foram identificadas por eletroforese em gel de poliacrilamida (SDS-PAGE 10%) e transferidas para membrana Hybond-CE, que foi incubada com anticorpo primário anti-HPA1 H-80 ou anti-HPA2 C-17 e revelada com anticorpo secundário conjugado com HRP IgG peroxidase. Isoformas das heparanases foram quantificadas por densitometria (Scion Image) e confirmada por RT-PCR em tempo real. Análises estatística foram realizadas utilizando o programa SPSS 13.0 Windows (SPSS, Chicago, IL). Os resultados demosntraram que ambas isoformas da HPA1 (HPA1 50 kDa e HPA1 65 kDa) e isoformas de HPA2 encontram-se significativamente aumentadas no plasma de pacientes com carcinoma gastrointestinal, comparando-se com o grupo controle. As análises em tempo real da expressão de HPA1 e HPA2 na fração mononuclear do sangue evidenciaram aumento de expressão de HPA1 e HPA2 em pacientes com carcinoma gastrointestinal corroborando com as análises do plasma. Os resultados obtidos demonstram que tanto HPA1 como HPA2 desempenham papel fundamental na carcinogênese gastrointestinal e, portanto, entender o papel fisiológico que desempenham possa fornecer informações para desenvolvimento de possivel terapia anti-tumoral.