Peptídeos Potencialmente Úteis no Tratamento do Câncer de Mama e o Envolvimento de Componentes da Matriz Extracelular na Resistência ao Trastuzumab. - Suarez, Eloah Rabello [UNIFESP] (2011)
O HER2 é um dos membros da família de receptores do fator de crescimento epidérmico capaz de promover a proliferação e diferenciação celular. Em pacientes com câncer de mama, a superexpressão de HER2 está associada com a agressividade da doença, resistência à quimioterapia e hormonioterapia e prognóstico desfavorável. Atualmente foi desenvolvido um anticorpo monoclonal específico contra o receptor HER2, denominado trastuzumab, no entanto, existem relatos de resistência dos tumores de mama ao tratamento com tal anticorpo e alta taxa de falência cardíaca como reação adversa, além do alto custo. O objetivo desta tese foi selecionar peptídeos específicos ligantes da proteína HER2 recombinante utilizando a tecnologia de “Phage Display”. Os peptídeos cíclicos selecionados, denominados Hercid e Tavelorb, foram quimicamente sintetizados. Os bacteriófagos expressando os peptídeos específicos selecionados, bem como os peptídeos sintéticos foram testados, em comparação com trastuzumab, em diferentes linhagens celulares tumorais de mama. O efeito foi avaliado em ensaios de viabilidade, migração e apoptose/necrose celular. Os resultados demonstraram que os peptídeos Hercid e Tavelorb foram capazes de reduzir a viabilidade de células SKBR3 em 50% isoladamente e 85% quando utilizados em associação. O peptídeo Tavelorb foi capaz de induzir a apoptose / necrose em 70% das células SKBR3 e, quando associado com Hercid, o efeito aumenta para 90%. Esta associação também promove redução da migração das células tumorais em 85%. Os ensaios de ligação ao receptor HER2 mostraram que ocorre competição entre os peptídeos selecionados e trastuzumab. Estes peptídeos co-localizam com vesículas ácidas em 40-50%, sugerindo possível indução de endocitose e destruição de HER2, além de co-localizarem com heparam sulfato em torno de 70%, sugerindo que a interação entre estas moléculas poderia desempenhar um papel importante na atividade antitumoral mediada por tais peptídeos e pelo trastuzumab. Os dados apresentados propõem o uso desses peptídeos como uma potencial alternativa para o tratamento do câncer de mama. Além disso, foi analisada a influência de alguns componentes da matriz extracelular no tratamento com trastuzumab. O efeito da superexpressão da Heparanase-1 (HPSE-1) foi avaliado utilizando células MCF-7 estavelmente transfectadas com o cDNA da HPSE-1 (MCF7-HPSE-1). Foram analisados o perfil e quantidade de glicosaminoglicanos, a expressão do RNAm da HPSE-1, HPSE-2, Sindecam-1 (Syn-1) e HER2, a atividade da HPSE-1 e a viabilidade celular em diferentes linhagens de de mama, tratadas ou não com trastuzumab. As células MCF7-HPSE-1 tornaram-se completamente resistentes ao tratamento com trastuzumab. A transfecção com HPSE-1 também alterou o perfil de galactosaminoglicanos desta célula. O anticorpo trastuzumab co-localiza com heparam sulfato (HS) e esta ligação é necessária para a atividade antitumoral do anticorpo. Em células MCF7, trastuzumab diminui a expressão do RNAm de HPSE- 1, HPSE-2, HER2 and Syn-1, enquanto nas células MCF7-HPSE-1 o anticorpo aumenta a expressão do RNAm de tais moléculas. As células SKBR3 possuem os níveis mais altos de expressão destas moléculas porém, apresentam menor atividade da HPSE-1, modulada pela HPSE-2, o que parece ser determinante para a resposta ao trastuzumab. Os resultados demonstraram que uma concentração ideal de HS na superfície celular e meio, regulada por trastuzumab, é necessária para sua ação. O HS secretado para o meio pode sequestrar o trastuzumab, diminuindo a quantidade do anticorpo disponível para interagir com o HER2 na superfície celular. O HS do meio pode bloquear a HPSE-2, a qual deixaria de inibir a atividade da HPSE-1 contribuindo para a resistência do tumor ao trastuzumab e favorecendo a progressão tumoral. Além disso, com a redução da relação HPSE-1/HER2 a sensibilidade das células de câncer de mama ao trastuzumab também diminui. Esses novas perspectivas poderia ser úteis no desenvolvimento de estratégias de superação da resistência dos tumores HER2 positivos ao trastuzumab.