Papel da proteína LAMP-2 associada à membrana lisossomal na invasão celular do Trypanosoma cruzi mediada pela molécula de superfície gp82

• Ano de defesa: 2019
• Autor(a) principal: Rodrigues, Joao Paulo Ferreira [UNIFESP]
• Orientador(a): Yoshida, Nobuko [UNIFESP]
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
• Palavras-chave em Português: Trypanosoma Cruzi; Invasão Celular Por Formas Metacíclicas; Proteínas Associadas A Membrana Lisossomal; gp82
• Palavras-chave em Inglês: Invasion By Metacyclic Forms; Trypanosoma Cruzi; Lysosome-Associated Membrane Proteins; gp82
• Link de acesso: https://sucupira.capes.gov.br/sucupira/public/consultas/coleta/trabalhoConclusao/viewTrabalhoConclusao.jsf?popup=true&id_trabalho=8029572; https://repositorio.unifesp.br/handle/11600/59404

A invasão celular pelas formas tripomastigotas metacíclicas do Trypanosoma cruzi é mediada pela glicoproteína de superfície gp82, que possui a propriedade de aderir à célula hospedeira de maneira receptor-dependente e induzir o espalhamento e exocitose de lisossomos, eventos necessários para a formação do vacúolo parasitóforo. O objetivo deste trabalho foi investigar o envolvimento das proteínas LAMP1 e LAMP2 (Lysosome-associated membrane proteins 1 and 2) no processo de invasão celular pelas formas metacíclicas, assim como determinar se essas proteínas se ligam à gp82. Utilizando células HeLa e a cepa CL de T. cruzi, foram realizados, inicialmente, ensaios de invasão na presença de anticorpo contra LAMP1 ou LAMP2. Na presença do anticorpo anti-LAMP2 a internalização das formas metacíclicas foi significativamente reduzida, enquanto o anticorpo anti-LAMP1 não teve efeito. Células HeLa deficientes em LAMP1 ou LAMP2 foram geradas e testadas quanto à suscetibilidade à invasão pelas formas metacíclicas. Os níveis de invasão das formas metacíclicas foram significativamente menores em células deficientes em LAMP2, em comparação às células selvagens, ao contrário das células deficientes em LAMP1, que apresentaram taxa de infecção similar à das células controle. As células deficientes em LAMP1 ou LAMP2 foram utilizadas em ensaios de ligação da proteína recombinante contendo a sequência completa da gp82. Foi observada ligação da gp82 recombinante às células LAMP2-deficientes significativamente reduzida em relação às células LAMP1-deficientes e às células selvagens.A possibilidade de LAMP2 ser o receptor para gp82 foi examinada em ensaios de co-imunoprecipitação, em que extratos de células HeLa e dos parasitas foram incubados com beads magnéticos acoplados ao anticorpo anti-LAMP1 ou anti-LAMP2. Foi detectada a ligação de gp82 a LAMP2, mas não a LAMP1. No ensaio de co-imunoprecipitação em que beads acoplados ao anticorpo monoclonal anti-gp82 foram utilizados, foi também detectada a ligação de gp82 a LAMP2.Nossos dados indicam que a invasão celular por formas metacíclicas ocorre pela ligação da gp82 ao seu receptor LAMP2.