Estudo das proteínas da família gp82 das formas metacíclicas do Trypanosoma cruzi - Atayde, Vanessa [UNIFESP] (2008)
Nosso principal objetivo foi caracterizar a família gp82 de proteínas, codificada pela família gênica gp82, que é parte da grande família multigênica gp85/trans-sialidase do T. cruzi. Até o início desse estudo, somente a gp82 de superfície, envolvida na invasão celular das formas metacíclicas da cepa CL e identificada pelo anticorpo monoclonal (MAb) 3F6, havia sido descrita. Na primeira parte, investigamos as bases da avirulência in vivo e in vitro das formas metacíclicas do clone CL-14 do T. cruzi , derivado da cepa CL. Descobrimos que a baixa infectividade desses parasitas está associada com a reduzida expressão da gp82 na superfície, reforçando o papel central da molécula na infecção pelo T. cruzi. Além disso, os dados sugeriram que devido à deficiência da gp82, as formas metacíclicas do clone CL-14, como as da cepa G, uti lizam preferencialmente as glicoproteínas gp35/50 para interagir com a célula hospedeira. Na segunda parte, analisamos a expressão e a localização de moléculas da família gp82 em formas metacíclicas das cepas G e CL do T. cruzi. Para isso, isolamos um novo membro (clone C03) que, em contraste com o clones de cDNA representantes da família gp82 previamente descritos, J18 (cepa G) e R31 (cepa CL), não contém o epítopo do MAb 3F6. Na análise comparativa da seqüência de aminoácidos do clone C03, observamos 59,1% de identidade com o clone J18 e 60,2% de identidade com o clone R31. Além disso, quando alinhamos as seqüências de aminoácidos dos clones C03 e Tc-85 (gp85 das formas tripomastigotas de cultura de tecido), observamos 57,2% de identidade, indicando que esse clone também é parte da família gp85/trans-sialidase. Utilizando os anticorpos policlonais anti-J18 e anti-C03, e o MAb 3F6, mostramos que membros da família gp82 são expressos em formas metacíclicas na superfície e intracelularmente, e que alguns desses membros têm localização diferenciada em parasitas dos grupos T. cruzi I e II. Ao contrário da gp82 reativa com o MAb 3F6, específica das formas metacíclicas, outras moléculas da família foram detectadas também nas formas tripomastigotas de cultura de tecido e amastigotas pelos anticorpos policlonais. Na terceira parte, investigamos o efeito da gp82 em sua forma recombinante (J18), sobre a linhagem de melanoma murino Tm5. Observamos que J18 liga-se a essas células induzindo a despolimerização dos filamentos de actina similar à citocalasina-D, droga indutora de apoptose em células de mamíferos. Em vista disso, fizemos uma análise comparativa das alterações no citoesqueleto de actina e eventos característicos de morte celular por apoptose nas células Tm5 tratadas com J18, e na linhagem de melanócitos melan-a, da qual Tm5 é derivada. Mostramos que J18 tem função indutora de apoptose somente sobre as células do melanoma Tm5. Descrevemos assim uma propriedade de um membro da família gp82, nunca antes descrita para nenhum outro componente molecularmente definido do T. cruzi.