Estudo da compartimentalização da sGTPASES RAS e RAC1 em células da linhagem de tumores humanos de mama MAMA MDA-MB-231 mediante ativação por fontes endógenas e exógenas de óxido nítrico: associação com a migração celular - Strumillo, Scheilla Teixeira [UNIFESP] (2019)
A Ras é uma proteína com atividade GTPásica expressa em todas as células que apresentam altas taxas de proliferação celular e apesar da baixa frequência das formas mutadas do oncogene RAS no câncer de mama (menor que 5%), há evidências que sugerem que a hiperatividade da proteína oncogênica Ras promove o crescimento e desenvolvimento desse tipo de câncer. Assim como a Ras, a Rac1 é uma GTPase e é alvo da sinalização mediada por Ras. Trabalhos publicados recentemente evidenciaram o envolvimento de Rac1 na migração de tumores de mama. O Objetivo Geral que norteou o desenvolvimento deste projeto foi avaliar se a produção endógena de óxido nítrico (NO) pela linhagem celular MDA-MB-231, representativa do câncer de mama triplo-negativo, ou a exposição destas células a uma fonte exógena do radical livre representada neste projeto pelo s-nitrosotiol s-nitrosoglutationa (GSNO), estimularia a sinalização celular através da GTPase Ras e se este era um processo que poderia ocorrer em dois compartimentos celulares, a membrana plasmática e o complexo de Golgi. Posteriormente, analisamos o envolvimento da GTPase Rac1, a qual se encontra downstream na via de sinalização de Ras. Também queríamos determinar se a compartimentalização deste processo de sinalização celular mediado pelo NO seria determinante para as capacidades de migração e proliferação da linhagem tumoral MDA-MB-231. Em nossos resultados verificamos que o GSNO estimulou a atividade de Ras nas células MDA-MB-231, porém não estimulou a migração destas células. Embora o tratamento com GSNO tenha estimulado a viabilidade celular, a proliferação das células MDA-MB-231 aumentou sutilmente, resultados que também observamos após o estímulo com LPS. Especulamos que a alta produção basal de NO nessas células seja um fator crítico para explicar os efeitos pouco acentuados do doador de NO na proliferação das células MDA-MB-231. O estímulo destas células com LPS resultou na produção endógena de NO e na compartimentalização de Rac1 para a região perinuclear após duas horas de estímulo, período que coincidiu com o estímulo de sua atividade. Nossos resultados também sugeriram que nas células MDA-MB-231, Ras se encontrava aparentemente residente na região perinuclear. Concluímos que o NO produzido endogenamente, mediante o estímulo das células com LPS, foi determinante para o estímulo de migração das células MDA-MB-231. Desta via de sinalização associada à migração celular participam as GTPases Ras e Rac1, iNOS, Src, PLC e íons Ca2+ .