Análise genômica comparativa de um clone de trypanosoma cruzi e a cepa parental - Maldonado, Danielle Rodrigues Cortez [UNIFESP] (2016)
O táxon Trypanosoma cruzi consiste em populações geneticamente heterogêneas que diferem tanto em aspectos genotípicos, adaptações fenotípicas e virulência em relação ao hospedeiro mamífero. A variabilidade genética também reflete na organização do genoma. Variações cariotípicas inter- e intra-cepa tem sido relatadas, sugerindo que rearranjos cromossômicos ocorreram durante a evolução deste parasita. O clone D11 é um clone derivado de uma única célula da cepa G de T. cruzi, selecionado pelo método de diluição mínima e por infecção de células Vero com tripomastigotas metacíclicos. Em um trabalho anterior, nós demonstramos a existência de diferenças fenotípicas, genotípicas e cariotípicas entre clone D11 e a cepa parental G. Nós aplicamos a hibridização genômica comparativa intraespecífica para identificar regiões cromossômicas com variações do número de cópias genicas entre o clone D11 e a cepa G. As alterações mais comumente observadas no clone D11 foram deleções e duplicações de pequenos segmentos cromossômicos (<50 kb) que poderiam ser mediadas por recombinação homóloga. A maioria das alterações foi relacionada com a perda de DNA e a distribuição desigual de genes entre as regiões de perda ou ganho de DNA sugerem que as famílias multigênicas podem estar envolvidas em eventos de recombinação entre a cepa G e o clone D11. Os cariótipos do clone D11 e da cepa G diferem em número e tamanho das bandas cromossômicas. Os rearranjos cromossômicos no clone D11 detectados pela hibridização de ?chromoblots? com marcadores cromossomo-específicos foram confirmados aCGH. Baseando-se nos dados de aCGH nós propomos mecanismos de recombinação para explicar os rearranjos cromossômicos. As alterações genômicas detectadas por aCGH sugerem a presença de um genoma dinâmico que responde à pressão ambiental variando o número de cópias genicas e sua distribuição no cromossomo. Estas alterações poderiam estar presentes em na população original, ou seja, uma população multiclonal, ou foram induzidas pelo estresse causado na clonagem em uma população monoclonal. Nossos dados apoiam a hipótese de uma população multiclonal em T. cruzi. Porém, as evidências atuais sugerem predominância de aneuploidia segmentada em T. cruzi, isto é, envolvendo partes do cromossomo, enquanto em Leishmania eventos envolvendo todo o cromossomo (aneuploidia cromossômica) são os mais comuns.