A aspartil aminopeptidase APE4 contribui para os atributos de virulência em Cryptococcus neoformans

• Ano de defesa: 2016
• Autor(a) principal: Gontijo, Fabiano de Assis [UNIFESP]
• Orientador(a): Vallim, Marcelo Afonso [UNIFESP]
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• dARK ID: ark:/48912/001300001z45v
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal de São Paulo
• Palavras-chave em Português: Aspartil aminopeptidase; APE4; Crescimento a 37°c; Cryptococcus neoformans; Virulência
• Palavras-chave em Inglês: Aspartyl aminopeptidase; APE4; Growth at 37°c; Cryptococcus neoformans; Virulence
• Link de acesso: https://sucupira.capes.gov.br/sucupira/public/consultas/coleta/trabalhoConclusao/viewTrabalhoConclusao.jsf?popup=true&id_trabalho=3625600; http://repositorio.unifesp.br/handle/11600/46263

Cryptococcus neoformans é um fungo patogênico oportunista de seres humanos que infecta principalmente, pacientes imunocomprometidos. Quando não tratada, pode levar à morte e devido às semelhanças entre células fúngicas e animais, os compostos antifúngicos disponíveis para tratar micoses são limitados e, geralmente, resultam em toxicidade para o hospedeiro. Ainda, a literatura traz relatos de linhagens clínicas e ambientais com resistência aos antifúngicos de uso canônico. Essa limitação leva investigadores a ampliar o conhecimento sobre a biologia de fungos patogênicos em busca de novos alvos terapêuticos e fármacos. Nesse sentido, o Doutor Marcelo A. Vallim gerou uma biblioteca de mutantes com inserção aleatória de um cassete que confere resistência à neomicina mediada por Agrobacterium tumefaciens com o objetivo de identicar mutantes incapazes de crescer na temperatura fisiológica dos mamíferos (37°C). Esta biblioteca foi descrita no trabalho de Gontijo et al. (2014). Entre os vários mutantes sensíveis à temperatura de 37°C, foi identificado um com a interrupção do gene APE4 que codifica a proteína aspartil aminopeptidase. Em Saccharomyces cerevisiae, a metaloprotease da família M18 Ape4 é ativada pela privação de nitrogênio. Esta proteína está envolvida na autofagia, e também faz parte da Via de transporte do citoplasma para o vacúolo (CVT) junto com as proteínas Ams1, Ape1, Atg11 e Atg19. A falta da proteína Ape4 em S. cerevisiae não impede o crescimento à alta temperatura, entretanto, em C. neoformans, o mutante ape4 não cresce a 37°C, produz menos melanina e apresenta menor volume capsular a 30°C e 37°C. A linhagem ape4 apresenta maior sensibilidade ao antifúngico fluconazol e menor sobrevivência no interior de macrófagos (p<0,05), quando comparada com as linhagens selvagem (KN99) e reconstituída (ape4+APE4), ainda, os mutantes ape4 são avirulentos em modelo animal. Os experimentos com a proteína de fusão GFP