Biogênese do vacúolo de Leishmania: papel da subunidade ATP6V0d2 na homeostase de colesterol - Pessoa, Carina Carraro [UNIFESP] (2019)
As ATPases Vacuolares H + (v-ATPases) são enzimas multiméricas dependentes de ATP associadas à membrana, responsáveis por bombear prótons do citosol para o lúmen das organelas intracelulares, controlando assim a acidificação dos lisossomos, endossomos e outras vesículas intracelulares. Elas exibem dois domínios funcionais, o V1 (citosólico, composto por 8 subunidades) e V0 (membranar, composto por 6 subunidades). Além da acidificação de organelas, as v-ATPases são alternativamente implicadas na fusão de membrana e nas funções anti-inflamatórias controladas por uma subunidade variante, d2, do domínio V0 (ATP6V0d2). Leishmania spp. são parasitas que causam leishmaniose tegumentar ou visceral em humanos e outros animais e constituem um grande problema de saúde em países pobres e em desenvolvimento. São parasitas dimórficos encontrados extracelularmente no intestino médio dos insetos vetores como promastigotas flagelados e alongados e intracelularmente em macrófagos de hospedeiros mamíferos como amastigotas arredondadas. Espécies como Leishmania (Leishmania) amazonensis, L. mexicana e L. pifanoi são conhecidas por se multiplicarem em vacúolos parasitóforos (VP) grandes e fusogênicos, induzindo a regulação positiva de ATP6V0d2. Em comparação com outras espécies de Leishmania, elas também exibem, pelo menos in vitro, uma notável resistência a mecanismos de eliminação de parasitas mediados por interferon-gama (IFN-γ) e lipopolissacarídeo (LPS) dentro de macrófagos ou por tratamento direto com espécies reativas de oxigênio (ROS). Entretanto, uma relação causal entre o desenvolvimento de grandes VPs e a resistência do parasita em macrófagos inflamatórios permanece obscura, especialmente in vivo. Portanto, avaliamos o papel do ATP6V0d2 na biogênese de vacúolos contendo patógenos utilizando macrófagos silenciados para ATP6V0d2 infectados com o protozoário parasita L. amazonensis. O silenciamento de ATP6V0d2 diminuiu os níveis de colesterol dos macrófagos e inibiu o aumento do VP sem interferir na multiplicação do parasita. No entanto, os parasitas necessitaram de ATP6V0d2 para resistir ao influxo de colesterol derivado de lipoproteína de baixa densidade oxidada (ox-LDL), que restaurou o aumento do VP em macrófagos silenciados, repondo o colesterol dos macrófagos. Assim, revelamos a subversão da função da V-ATPase da célula hospedeira mediada por parasitas em relação à retenção de colesterol, que é necessária para estabelecer um nicho de parasita intracelular resistente à inflamação.