Papel das GTPases Cdc42, RhoA e Rac1 no citoesqueleto de actina durante a invasão celular pelas formas tripomastigotas metacíclicas e de cultura de tecido de Trypanosoma cruzi

• Ano de defesa: 2019
• Autor(a) principal: Bonifacio, Bruno Souza [UNIFESP]
• Orientador(a): Mortara, Renato Arruda [UNIFESP]
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• dARK ID: ark:/48912/001300001fj14
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
• Palavras-chave em Português: Trypanosoma Cruzi; Invasão Celular; Actina; Gtpases; Tripomastigotas Metacíclicos; Tripomastigotas De Cultura De Tecido.
• Palavras-chave em Inglês: Trypanosoma Cruzi; Cell Invasion; Actin; Gtpases; Metacyclic Trypomastigotes; Tissue Culture Trypomastigotes.
• Link de acesso: https://sucupira.capes.gov.br/sucupira/public/consultas/coleta/trabalhoConclusao/viewTrabalhoConclusao.jsf?popup=true&id_trabalho=7741216; https://repositorio.unifesp.br/handle/11600/59405

A invasão celular pelas formas tripomastigotas metacíclicas (TMs) e tripomastigotas de cultura de tecido (TCTs) de Trypanosoma cruzi é um processo complexo que envolve a interação parasita-hospedeiro, sendo que, o papel do citoesqueleto de actina da célula hospedeira ainda é controverso na literatura. As GTPases Cdc42, RhoA e Rac1 são mediadores chave do citoesqueleto de actina que promovem sua polimerização, de acordo com estímulos celulares e ação das suas proteínas efetoras. O objetivo deste trabalho foi avaliar a dinâmica de actina e a participação das proteínas Cdc42, RhoA e Rac1 durante a invasão celular pelas formas tripomastigotas de T. cruzi. Em ensaios de invasão com células HeLa depletadas para as GTPases (kd), TMs apresentaram menor invasão nos grupos Cdc42-kd e RhoA-kd enquanto que os TCTs apresentaram perfil inibitório para Cdc42- kd RhoA-kd e Rac1-kd. Nos ensaios de invasão com células HeLa superexpressando as GTPases estudadas, nas construções wild type, constitutivamente ativa e dominante negativa, vimos um perfil de invasão que tanto para TCTs quanto para TMs variou entre aumento e inibição a depender da GTPase e construção. Observando a distribuição dos lisossomos nas células depletadas para as GTPases, identificamos maior espalhamento dessas organelas mesmo na ausência dos parasitas. Nossos resultados mostram a participação de Cdc42 em ambas as formas tripomastigotas enquanto que Rac1 tem papel significante apenas para TCTs, por outro lado, a proteína RhoA apresenta papel negativo na invasão de TMs e TCTs. Nos ensaios de invasão com células pré-tratadas com Citocalasina D, Latrunculina B, Faloidina e Jasplakinolide, tanto TMs quanto TCTs tiveram sua invasão inibida. Por fim, ensaios de recrutamento de actina apresentaram, tanto em TCTs quanto em TMs um perfil de recrutamento inconsistente, ou seja, alguns parasitas recrutam actina enquanto outros não recrutam durante o processo de invasão. Finalmente, nossos resultados sugerem que o citoesqueleto de actina desempenha um papel indireto na invasão de TCTs e TMs, mas que outros mecanismos ainda carecem de elucidação.